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融合樹状細胞を用いた自己免疫性肝炎特異的自己抗原の同定

使用融合树突状细胞鉴定自身免疫性肝炎特异性自身抗原

基本信息

批准号：
12770280
负责人：
小池和彦
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Jikei University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、我々が新たに作製した高分化型肝癌細胞と融合樹状細胞の融合細胞移入によるマウス自己免疫性肝炎(AIH)モデルに出現する、正常肝細胞を認識する抗体の認識抗原を同定することにより、未だ同定されていないAIHの疾患特異的自己抗原を明らかにすることである。さらに本年度は本抗体の抗体依存性細胞障害(ADCC)を介した肝細胞障害への関与についても検討を加えた。*抗体認識抗原に対する細胞性免疫反応の解析と認識抗原を用いたモデル再構成(1)大腸菌発現ベクターを用いた抗体結合タンパクのスクリーニングヒト肝poly A(+) RNAより作製した肝cDNAライブラリーを各種制限酵素にて切断して得られた遺伝子断片を、大腸菌T7発現ベクターpGEMEX-1に導入し、T7 gene 10融合タンパクとして大腸菌表面に発現させ、抗体と結合するクローンを選別し抗体結合タンパク遺伝子の同定を試みた。その結果2種類の候補遺伝子を同定することができた。(2)遺伝子パルスDCの移入によるAIHモデル誘導の確認同定した候補遺伝子をパルスしたDCの移入によるAIHモデルの再構成を試みたが、肝炎を誘導することができなかった。*抗肝細胞抗体の正常肝細胞に対する抗体依存性細胞障害(ADCC)の検討^<51>Crラベルした正常肝細胞およびhepa1-6細胞を標的細胞に用い、本モデルで出現する抗肝細胞抗体の抗体依存性肝細胞障害性をADCCアッセイにより解析したところ、弱いながらもADCC活性が認められ、本モデルにおいて抗肝細胞自己抗体が肝細胞障害機序に関与している可能性が示された。

The purpose of this study was to develop new methods for the identification of highly differentiated hepatocellular carcinoma cells, fusion dendritic cells, and fusion cell engraftment in patients with autoimmune hepatitis (AIH). This year, the antibody dependent cellular impairment (ADCC) of this antibody was investigated. * Antibodies recognize antigens, analyze cellular immune responses, recognize antigens, and reconstruct them.(1) E. coli production, use, antibody binding, and production of poly A(+) RNA.(2) Liver cDNA production, cleavage, and production of gene fragments by various restriction enzymes.(3) E. coli T7 production, pGEMEX-1 introduction, T7 gene 10 fusion protein was detected on E. coli surface, antibody binding protein was selected, and antibody binding protein was determined. The results of the two types of candidates are the same. (2)The identification of the candidate gene is based on the identification of the candidate gene. The identification of the candidate gene is based on the identification of the candidate gene. Antibody-dependent cellular impairment (ADCC) of anti-hepatocyte antibodies against normal hepatocytes <51>(NHCs) and target cells of Hepa1-6 cells was detected in the presence of NHCs. ADCC activity was detected in the presence of NHCs. ADCC activity was detected in the presence of NHCs.