C型肝炎ウイルスRNAのマイクロ断片化によるウイルス増殖制御法の開発

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肝細胞癌(以下、肝癌)の約80%がC型肝炎ウイルス(HCV)感染症に起因している。リバビリン併用ペグインターフェロンによって肝癌の基礎疾患である慢性C型肝炎のおよそ60%でウイルス排除が期待される。しかし、無効例の治療には有効な肝炎制御方法がない。インターフェロン治療無効例においては、HCVの感染した肝細胞が排除されにくく、それが無効の原因であることが明らかにされている。したがって、少数残存したHCV感染肝細胞からHCVが効率よく排除されれば、慢性C型肝炎におけるIFN治療成績は飛躍的に向上することが期待される。我々は、HCV感染肝細胞には、HCVゲノム複製中間体である二本鎖RNAとHCVのプロテアーゼが特異的に存在することを利用して、HCV二本鎖RNAをDicer酵素によってHCV感染肝細胞内でsiRNA化し、肝細胞に残存するHCVを排除する治療法の開発を目指して研究を行なっている。Dicer酵素の人体への悪影響を排除するために、Dicer酵素を低活性型で導入し、HCVのNS3プロテアーゼによってHCV感染肝細胞でのみDicer酵素が高度に活性化される系を開発した。HIV protein transducing domain (ptd)配列の後にHCVNS3プロテアーゼ切断ペプチド-Dicer酵素をつなげた発現バキュロウイルスを作製し、発現タンパクptd-pep-Dicerを精製した。この精製タンパクをHuh-7細胞およびHCV NS3プロテアーゼ発現Huh-7細胞クローンに導入して、Dicer酵素の活性を基質dsRNAを添加したところ、NS3プロテアーゼ発現Huh-7細胞のみにおいてDicer酵素活性が認められた。次いで、JFH-1ウイルス増殖Huh-7.5細胞にptd-pep-Dicerタンパクを導入した。ウイルス量の減少が認められたため、定量的な解析を行なっている。