網羅的発現情報解析に基く心不全病態診断法と治療法の開発

基于综合表达信息分析的心力衰竭诊断和治疗方法的开发

• 批准号: 15659182
• 负责人: 木村 彰方
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659182/
• 关键词: 心筋; 発現解析; 心筋症; 心筋梗塞; 心肥大; 心不全; BMP; MLP; 遺伝子発現; Z帯; 変異; 抗体; 介在板; 心筋障害; 新規遺伝子; 発現変化; 細胞内分布

DSSラットで心肥大期から心不全期にかけて大きく発現変化する遺伝子を287種同定した。それらのうち、MLPおよびBMP10について単クローン抗体を作製したため、これらを用いて心筋における発現分布を検討した。MLPはZ-I境界領域に分布し、心筋梗塞患者、心不全患者では血中MLP濃度が健常者と比較して有意に高値であることを確認したことから、これが心筋障害の血中マーカーとなると考えられた。一方、単クローン抗体を用いてBMP10は心筋細胞膜のみならずZ帯にも分布することを発見した。また、GFP-BMP10融合遺伝子をラット心筋初代培養細胞にトランスフェクトし、BMP10がZ帯に発現することを確認した。さらに、BMP10はZ帯でTcapと結合すること、ラット心筋細胞の肥大とサルコメア整合性の促進をもたらすことを見出し、これが心肥大のマーカーとなりうることを明らかにした。一方、心筋と骨格筋のサブトラクションライブラリーの解析から単離した遺伝子のうち、心筋に強く、骨格筋に弱く発現するH452遺伝子の解析を行った。まず、GFP-H452融合遺伝子をトランスフェクトしたラット心筋細胞で、H452がZ帯と介在板に発現することを明らかにした。この発現パターンはデスミンと類似しているため心筋症や筋ジストロフィー患者における変異を検索したところ、1名の肢帯型筋ジストロフィー患者に変異を見出した。ついで、H452に対する抗体を作製し、これを用いた検討を行ったところ、H452がZ帯および介在板に発現することが確認された。また、H452遺伝子変異を有する肢帯型筋ジストロフィー患者骨格筋試料を染色したところ、細胞内封入体を伴う特異的な所見を示したことから、この抗体が筋疾患診断に使用できると考えられた。これとは別に、機能連関を指標とした心筋症原因遺伝子解析を実施し、新規原因遺伝子CRYABを特定した。

DSS ラ ッ ト で heart hypertrophy stage か ら heart insufficiency period に か け て big き く 発 now - the す る heritage 伝 son を 287 with fixed し た. そ れ ら の う ち, MLP お よ び BMP10 に つ い て 単 ク ロ ー ン antibody を cropping し た た め, こ れ ら を with い て heart muscle に お け る 発 distribution を now beg し 検 た. MLP は し に Z -i state field distribution, the heart muscle infarction patients, patients with heart で は が health is often the blood MLP concentrations と compare し て intentionally に high numerical で あ る こ と を confirm し た こ と か ら, こ れ が heart muscle handicap of の blood マ ー カ ー と な る と exam え ら れ た. One party, 単 ク ロ ー ン antibody を with い て BMP10 は heart muscle cell membrane の み な ら ず Z 帯 に も distribution す る こ と を 発 see し た. ま た, GFP - but 伝 BMP10 fusion を ラ ッ ト heart muscle in the early generation of cultured cells に ト ラ ン ス フ ェ ク ト し, BMP10 が Z 帯 に 発 now す る こ と を confirm し た. さ ら に, BMP10 は Z 帯 で Tcap と combining す る こ と, ラ ッ ト の heart muscle cell hypertrophy と サ ル コ メ ア integrated の promote を も た ら す こ と を see し, こ れ が heart hypertrophy の マ ー カ ー と な り う る こ と を Ming ら か に し た. One party, the heart muscle と skeletal muscle の サ ブ ト ラ ク シ ョ ン ラ イ ブ ラ リ ー の parsing か ら 単 from し た heritage 伝 son の う ち, strong heart muscle に く, skeletal muscle に weak く 発 now す る H452 heritage 伝 son の parsing line を っ た. ま ず, GFP - but 伝 H452 fusion を ト ラ ン ス フ ェ ク ト し た ラ ッ ト で heart muscle cells, H452 が Z 帯 と interface in plate に 発 now す る こ と を Ming ら か に し た. こ の 発 now パ タ ー ン は デ ス ミ ン と similar し て い る た め heart muscle disease や reinforcement ジ ス ト ロ フ ィ ー patients に お け る - different を 検 cable し た と こ ろ, type 1 の limb 帯 reinforced ジ ス ト ロ フ ィ に ー patients - out different を し た. つ い で, H452 に す seaborne る し, the antibody を cropping こ れ を with い た 検 line for を っ た と こ ろ, H452 が Z 帯 お よ び interface in plate に 発 now す る こ と が confirm さ れ た. ま た, H452 heritage 伝 son - different を す る limb 帯 type steel ジ ス ト ロ フ ィ ー patients with skeletal muscle sample dyeing し を た と こ ろ and photosensitive cells into the body を う specific を な had seen in し た こ と か ら, こ の antibody に が muscle disease diagnosis using で き る と exam え ら れ た. こ れ と は に, function even masato を index と し た cause of disease of heart muscle but 伝 parsing を be し, cause of the new rules but 伝 CRYAB を specific し た.

项目成果

Arimura T, et al.: "A Cypher/ZASP mutation associated with dilated cardiomyopathy alters the binding affinity to protein kinase C."J.Biol.Chem.. (in press).

Arimura T 等人：“与扩张型心肌病相关的 Cypher/ZASP 突变改变了与蛋白激酶 C 的结合亲和力。”J.Biol.Chem..（出版中）。

αβ-crystallin in dilated cardiomyopathy

αβ-晶状体蛋白在扩张型心肌病中的作用

• 发表时间: 2006
• 期刊: Biochem Biophys Res Coimnun (印刷中)
• 作者: Inagaki N;Hayashi T;Arimura T;Koga Y;Takahashi M;Shibata H;Teraoka K;Chikamori T;Yamashina A;Kimura A
• 通讯作者: Kimura A

TCAP mutations in hypertrophic cardiomyopathy and dilated cardiomyopathy

肥厚型心肌病和扩张型心肌病中的 TCAP 突变

• 发表时间: 2004
• 期刊: J Am. Col Cardiol 44
• 作者: Hayashi T;Arimura T;Itoh-Satoh M;Ueda K;Hohda S;Inagaki;N;Takahashi M;Hori H;Yasunami M;Nishi H;Koga Y;Nakamura H;Matsuzaki M;Cho BY;Bae SW;You CW;Han KH;Park JE;Knoll R;Hoshijima M;Chien KR;Kimura A
• 通讯作者: Kimura A

Hayashi T, et al.: "Identification and functional analysis of a caveolon-3 mutation associated with familial hypertrophic cardiomyopathy."Biochem.Biophys.Res.Commun. 313. 178-184 (2004)

Hayashi T 等人：“与家族性肥厚型心肌病相关的 Caveolon-3 突变的鉴定和功能分析。”Biochem.Biophys.Res.Commun。

Functional analysis of titin/connectin N2-B mutations found in cardiomyopathy

• DOI: 10.1007/s10974-005-9018-5
• 发表时间: 2005-12-01
• 期刊: JOURNAL OF MUSCLE RESEARCH AND CELL MOTILITY
• 影响因子: 2.7
• 作者: Matsumoto, Yuji;Hayashi, Takeharu;Kimura, Akinori
• 通讯作者: Kimura, Akinori