網羅的発現情報解析に基く心不全病態診断法と治療法の開発

基于综合表达信息分析的心力衰竭诊断和治疗方法的开发

基本信息

批准号：
15659182
负责人：
木村彰方
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

DSSラットで心肥大期から心不全期にかけて大きく発現変化する遺伝子を287種同定した。それらのうち、MLPおよびBMP10について単クローン抗体を作製したため、これらを用いて心筋における発現分布を検討した。MLPはZ-I境界領域に分布し、心筋梗塞患者、心不全患者では血中MLP濃度が健常者と比較して有意に高値であることを確認したことから、これが心筋障害の血中マーカーとなると考えられた。一方、単クローン抗体を用いてBMP10は心筋細胞膜のみならずZ帯にも分布することを発見した。また、GFP-BMP10融合遺伝子をラット心筋初代培養細胞にトランスフェクトし、BMP10がZ帯に発現することを確認した。さらに、BMP10はZ帯でTcapと結合すること、ラット心筋細胞の肥大とサルコメア整合性の促進をもたらすことを見出し、これが心肥大のマーカーとなりうることを明らかにした。一方、心筋と骨格筋のサブトラクションライブラリーの解析から単離した遺伝子のうち、心筋に強く、骨格筋に弱く発現するH452遺伝子の解析を行った。まず、GFP-H452融合遺伝子をトランスフェクトしたラット心筋細胞で、H452がZ帯と介在板に発現することを明らかにした。この発現パターンはデスミンと類似しているため心筋症や筋ジストロフィー患者における変異を検索したところ、1名の肢帯型筋ジストロフィー患者に変異を見出した。ついで、H452に対する抗体を作製し、これを用いた検討を行ったところ、H452がZ帯および介在板に発現することが確認された。また、H452遺伝子変異を有する肢帯型筋ジストロフィー患者骨格筋試料を染色したところ、細胞内封入体を伴う特異的な所見を示したことから、この抗体が筋疾患診断に使用できると考えられた。これとは別に、機能連関を指標とした心筋症原因遺伝子解析を実施し、新規原因遺伝子CRYABを特定した。

在DSS大鼠中发现了从心脏肥大到心力衰竭的287个基因。其中，为MLP和BMP10制备了单克隆抗体，并使用这些抗体进行了心肌中的表达分布。 MLP分布在Z-I边界区域，与健康个体相比，心肌梗塞和心力衰竭患者的血液MLP浓度明显更高，这被认为是心肌疾病的血液标记。另一方面，我们发现BMP10不仅分布在心肌细胞膜中，而且分布在Z-Zone中。此外，将GFP-BMP10融合基因转染到原代培养的大鼠心肌细胞中，并证实BMP10在Z带中表达。此外，我们发现BMP10与Z带中的TCAP结合，从而导致大鼠心肌细胞的肥大和肌节的完整性增加，这表明这可能是心脏肥大的标志。另一方面，分析了从心肌和骨骼肌减法库分析的基因中，分析了在心肌中强烈表达而在骨骼肌中弱表示的H452基因。首先，据揭示了H452在Z带和板室中用GFP-H452融合基因转染的大鼠心肌细胞中表达。这种表达模式与Desmin相似，因此，当我们在心肌病和肌肉营养不良的患者中寻找突变时，我们发现一名腰围肌肉营养不良患者的突变。然后使用该抗体制备针对H452的抗体并测试，并证实H452在Z带和层中表达。此外，当用H452基因突变的肢体肌肉营养不良患者染色骨骼肌样品时，人们认为该抗体可用于诊断肌肉疾病，因为它显示出细胞内包容体的特定发现。另外，使用功能链接作为指标进行心肌病因致病基因分析，并确定了新的病因基因cryab。

项目成果

期刊论文数量（14）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Arimura T, et al.: "A Cypher/ZASP mutation associated with dilated cardiomyopathy alters the binding affinity to protein kinase C."J.Biol.Chem.. (in press).

Arimura T 等人：“与扩张型心肌病相关的 Cypher/ZASP 突变改变了与蛋白激酶 C 的结合亲和力。”J.Biol.Chem..（出版中）。

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

αβ-crystallin in dilated cardiomyopathy

αβ-晶状体蛋白在扩张型心肌病中的作用

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Biochem Biophys Res Coimnun (印刷中)
影响因子：
0
作者：
Inagaki N;Hayashi T;Arimura T;Koga Y;Takahashi M;Shibata H;Teraoka K;Chikamori T;Yamashina A;Kimura A
通讯作者：
Kimura A

TCAP mutations in hypertrophic cardiomyopathy and dilated cardiomyopathy

肥厚型心肌病和扩张型心肌病中的 TCAP 突变

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
J Am. Col Cardiol 44
影响因子：
0
作者：
Hayashi T;Arimura T;Itoh-Satoh M;Ueda K;Hohda S;Inagaki;N;Takahashi M;Hori H;Yasunami M;Nishi H;Koga Y;Nakamura H;Matsuzaki M;Cho BY;Bae SW;You CW;Han KH;Park JE;Knoll R;Hoshijima M;Chien KR;Kimura A
通讯作者：
Kimura A

Hayashi T, et al.: "Identification and functional analysis of a caveolon-3 mutation associated with familial hypertrophic cardiomyopathy."Biochem.Biophys.Res.Commun. 313. 178-184 (2004)

Hayashi T 等人：“与家族性肥厚型心肌病相关的 Caveolon-3 突变的鉴定和功能分析。”Biochem.Biophys.Res.Commun。