抗体アレイ法を応用した造血器腫瘍細胞におけるシグナル伝達因子異常の網羅的解析

抗体芯片法综合分析造血肿瘤细胞信号转导因子异常

基本信息

批准号：
15659226
负责人：
三浦修
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659226/
关键词：
造血器腫瘍シグナル伝達白血病悪性リンパ腫 STAT5 Jak2 Lyn チロシンリン酸化

项目摘要

細胞内シグナル伝達機構においてチロシンリン酸化は、チロシンキナーゼの活性化やその基質蛋白質のリン酸化によるシグナル伝達経路の活性化を意味する事から、造血器腫瘍(各種白血病、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫等)の患者検体(末梢血、骨髄穿刺液、リンパ節生検材料等)を採取し、単核細胞分画の細胞抽出液を調整し、抗体アレイ法を応用して網羅的にシグナル伝達関連蛋白質のチロシンリン酸化を多数の症例や解析するための実験条件を設定する目的で、まず抗リン酸化チロシン抗体(4G10)およびJak2・STAT3・STAT5・Erk・CrkL・Lyn等の種々のシグナル伝達因子のリン酸化特異的抗体を用いてWesternブロット法による解析を施行した。これらの解析により、数例の急性骨髄性白血病症例においてSTAT5のチロシンリン酸化を、また、急性リンパ性白血病の1症例においてLynの強いチロシンリン酸化とRasGAPとの結合を見いだし、in vitro kinase assayによりLynの強い活性増強を認めた。さらに、慢性骨髄性白血病症例ではBCR/ABLの自己リン酸化を確認すると供に、下流のSTAT5やCrkLのチロシンリン酸化の亢進とSTI571処理による抑制を認めた。これらの結果をコントロールとして用いることで、抗体アレイ法を応用した網羅的シグナル伝達関連蛋白質のチロシンリン酸化検出法の条件を設定し、シグナル伝達因子や経路の活性化のパターンと、疾患の病態分類・治療反応性・予後との相関に関してもデータを蓄積して関連を明らかにするため症例の蓄積中である。

在细胞内信号传导机制中，酪氨酸磷酸化是指酪氨酸激酶的激活以及通过其底物蛋白的磷酸化来激活信号通路。 Therefore, patient specimens (peripheral blood, bone marrow aspiration, lymph node biopsy, etc.) for hematopoietic tumors (various leukemias, malignant lymphomas, multiple myeloma, etc.) were collected, adjusted cell extracts of mononuclear cell fractions, and applied antibody array methods to set experimental conditions for comprehensive analysis of tyrosine phosphorylation of signaling-related蛋白质。首先，使用抗磷酸化的酪氨酸抗体（4G10）和各种信号因子（例如JAK2，STAT3，STAT3，ERK，CRKL和LYN）的抗磷酸化酪氨酸抗体（4G10）和磷酸化特异性抗体进行分析。这些分析揭示了在几个急性髓样白血病病例中STAT5的酪氨酸磷酸化，并且在一种情况下，在急性淋巴细胞性白血病，LYN的强酪氨酸磷酸化和与RasGAP的结合，并且体外激酶分析显示出强大的Lyn活性增强。此外，在慢性髓样白血病的情况下，确认了BCR/ABL的自磷酸化，并观察到下游STAT5和CRKL的酪氨酸磷酸化增加，并通过STI571治疗抑制。使用这些结果作为对照，设置了使用抗体阵列方法检测与信号转导相关蛋白质酪氨酸磷酸化的综合方法的条件，并且正在集中案例以澄清信号传导因素与途径激活模式之间的关系以及病理分类，治疗，治疗，治疗反应和疾病的预后。