全く新しい癌治療法の主導権を握る有機カチオントランスポーター遺伝子の単離機能解析

有机阳离子转运蛋白基因的分离和功能分析将带来全新的癌症治疗

基本信息

批准号：
16659348
负责人：
阿部高明
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659348/
关键词：
トランスポーター有機カチオンアドリアマイシン

项目摘要

癌細胞の抗癌剤耐性に関与する、排出側transporterの詳細が明らかになりつつある一方、抗癌剤の取り込みに寄与する側の分子機構は、未だ不明の点が多い。我々は、抗癌剤Adriamycinの取り込みを担うOrganic Cation/Adriamycin Transpoter, OCA1を単離することに成功した。本研究では、更なる取り込み側transporterの単離および機能解析を目的とした。OCA1からprimerを作製し、肝・腎などのLibraryからのRapid Amplification of cDNA End法による新規transporterの単離を試みたが、新規のtransporterは単離し得なかった。そのため、OCA1の機能解析を進めることとした。Adriamycinに対する感受性規定にOCA1が関与しているか否かを検討した。Northern blotでOCA1の発現が認められないJurkat cell(白血病細胞株)にOCA1をtransfectし、Adryamicinに対する感受性をコントロールと比較した。その結果、OCA1を遺伝子導入していないJurkat cellと比較して、2μMのAdryamicinに対するviabilityが有意に低下していた。次に臨床検体でのOCA1の発現を調べたところ、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病細胞において、OCA1高発現白血病細胞株HL-60と比較して平均2倍のmRNAの発現が認められた。また、60種類の癌細胞株におけるOCA1の発現強度をrealtime RT-PCRでしらべたところ大腸癌や膵癌細胞で高い発現が認められた。さらにこれらの細胞のOCA1発現と各種抗癌剤に対する感受性を比較し相関する薬剤を同定することができた。

尽管癌细胞中参与抗癌耐药性的排泄转运蛋白的细节越来越清楚，但有关分子机制有助于吸收抗癌药物的分子机制仍然有许多未知数。我们已经成功地分离了有机阳离子/adrimycin转蛋白OCA1，该转蛋白负责摄取抗癌药物adrimycin。这项研究旨在进一步分离和功能分析摄取转运蛋白。从OCA1制备底漆，并试图通过从肝脏和肾脏等文库中快速扩增cDNA端来分离新的转运蛋白，但是不可能新的转运蛋白。因此，我们决定继续对OCA1进行功能分析。我们调查了OCA1是否参与了阿霉素的易感性法规。将OCA1转染到Jurkat细胞（白血病细胞系）中，其中未观察到OCA1在北印迹中观察到OCA1的表达，并将对adryamicin的敏感性与对照组进行了比较。结果，与未转变OCA1的Jurkat细胞相比，在2μM下，阿霉素的生存能力显着降低。接下来，当在临床标本中检查OCA1的表达时，与OCA1高表达的白血病细胞系HL-60相比，在急性髓样白血病和急性淋巴细胞性白血病细胞中观察到mRNA表达。此外，当使用实时RT-PCR检查60个癌细胞系中OCA1表达的强度时，在结肠和胰腺癌细胞中观察到高表达。此外，可以将这些细胞的OCA1表达与对各种抗癌剂的敏感性进行比较，并确定相关的药物。