消化器固形癌特異的発現トランスポーターLST-2を用いた癌指向性抗癌剤の開発

利用胃肠道实体瘤特异性表达转运蛋白LST-2开发癌症定向抗癌药物

• 批准号: 13218011
• 负责人: 阿部 高明
• 金额: $ 4.74万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13218011/
• 关键词: トランスポーター; アデノウィルス; 感受性私権; 抗癌剤; 有機アニオン

申請者は最近単離した新規有機アニオントランスポーターLST-1に引き続きLST-2を世界に先駆けて単離した。LST-2は正常ヒト肝臓のみに弱く発現していたが胃癌、大腸癌、膵臓癌において多量に発現していた。各種発現系の結果からLST-2はMTXを飽和的にかつ濃度依存的に輸送し培養細胞へのLST-2遺伝子の導入は細胞のMTXに対する感受性を高めることが明らかとなった。本研究ではアデノウイルスを用いたLST-2強制発現細胞を作製し、その発現細胞に取り込まれる蛍光標識物質の蛍光強度に対する各種薬物の阻害効率を指標に消化器固形癌指向性薬物の探索を目的とする。我々はアデノウイルスを用いたトランスポーターの強制発現系を樹立し、蛍光マイクロタイタープレートを用いてLST-2で輸送される蛍光基質の取り込みの抑制を指標とした消化器固形癌指向性薬物のスクリーニング系の開発を行った。動物細胞で働くCAGプロモーターを含むcosmid vector, pAxCAwtにLST-1,LST-2c DNAの翻訳領域を挿入、アデノウイルスゲノムDNAと共にリン酸カルシウム法でHEK293細胞にcotransfectionし、LST-1,LST-2組み換えアデノウイルス(AdLST-1,AdLST-2)を得た。AdLST-1,AdLST-2を各種細胞株に感染させ、放射線標識体の取り込み実験を行った。AdLST-1,AdLST-2を感染させたHepG2,PLC/PRF/5,HT17で[3H]-タウロコール酸(TCA)の取り込みを検討したところ、コントロールに対して最大36.7倍の有意な取り込みが認められた。AdLST-1,AdLST-2の感染により発現したLST-1及びLST-2は共に濃度依存的、飽和的にTCAを取り込んだ。また、ケノデオキシコール酸(CDCA)はLST-2によって濃度依存的飽和的に取り込まれ、そのKm値は0.66+0.11μMであり非常に親和性の高い基質であることがわかり、機能的にも効果的に細胞にLST-2を導入することが可能になった。

The applicant is the latest to leave the new rules of the organization, LST-1, LST-2, and the world's first to leave. LST-2 was found in normal liver tissue and in large amounts in stomach, colon and colon cancer. The results showed that LST-2 cells were sensitive to MTX saturation and concentration-dependent transport. LST-2 cells were sensitive to MTX introduction. The purpose of this study is to explore the inhibition efficiency of various chemicals, the index of digestive solid cancer, and the target of LST-2 stress developing cells. The stress response system of the digestive tract was established and the development of the stress response system of the digestive tract was carried out by using the LST-2 as an indicator of the inhibition of the digestive tract solid cancer. Animal cell CAG protocol contains cosmid vector, pAxCAwt, LST-1,LST-2c DNA and cotransfection (AdLST-1,AdLST-2). AdLST-1,AdLST-2 are used for infection and radiation identification of various cell lines. AdLST-1,AdLST-2 were infected with HepG2,PLC/PRF/5, HT17,[3H]-TCA, and the maximum was 36.7 times. AdLST-1,AdLST-2 infection is found in both LST-1 and LST-2 in a concentration-dependent, saturating manner. CDCA is a concentration-dependent saturation factor for LST-2. The Km value of CDCA is 0.66+0.11μM. CDCA has a high affinity for LST-2. CDCA is a functional factor for LST-2.

项目成果

阿部高明, 海野倫明, 徳井太郎: "有機アニオントランスポーター oatp/Lstとその機能"蛋白核酸酵素. 46. 612-620 (2001)

Takaaki Abe、Michiaki Unno、Taro Tokui：“有机阴离子转运蛋白 oatp/Lst 及其功能”蛋白质核酸酶 46. 612-620 (2001)。

Takeuchi A., Masuda S., Saito H., Abe T., Inui K.: "Multispecific substrate recognition of kidney-specific organic anion transporers OAT-K1 and OAT-K2"J Pharmacol Exp Ther. 299. 1-7 (2001)

Takeuchi A.、Masuda S.、Saito H.、Abe T.、Inui K.：“肾脏特异性有机阴离子转运蛋白 OAT-K1 和 OAT-K2 的多特异性底物识别”J Pharmacol Exp Ther。

Sugiyama D., Kusuhara H., Shitara Y., Abe T., et al.: "Characterization of the efflux transport of 17beta-estradiol-D-17beta-glucuronide from the brain across the blood-brain barrier."J Pharmacol Exp Ther. 298. 316-322 (2001)

Sugiyama D.、Kusuhara H.、Shitara Y.、Abe T. 等人：“17β-雌二醇-D-17β-葡萄糖醛酸从大脑穿过血脑屏障的流出转运的表征。”J Pharmacol Exp

Nakai D., Nakagomi R., Furuta F., Tokui T., Abe T., Ikeda T., Nishimura K.: "Human Liver-specific Organic Anion Transporter, LST-1,Mediates Uptake of Pravastatin by Human Hepatocytes"J Pharmacol Exp Ther.. 295. 861-867 (2001)

Nakai D.、Nakagomi R.、Furuta F.、Tokui T.、Abe T.、Ikeda T.、Nishimura K.：“人肝脏特异性有机阴离子转运蛋白，LST-1，介导人肝细胞对普伐他汀的摄取”J

Fujiwara k., Adachi H., Nishio T., Tokui T., Okabe M., Abe T.et al.: "Isolation of a novel human organic anion transporting polypeptide OATP-E which transports thyroid hormone."Endocrinology. 142. 2005-2012 (2001)

Fujiwara k.、Adachi H.、Nishio T.、Tokui T.、Okabe M.、Abe T.等人：“分离一种新型人类有机阴离子转运多肽 OATP-E，该多肽转运甲状腺激素。”内分泌学。