薬剤性腎障害におけるアポトーシス誘動と腎障害発現防御に関する研究

药物性肾损伤中细胞凋亡诱导及预防肾损伤的研究

• 批准号: 10877389
• 负责人: 乾 賢一
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10877389/
• 关键词: 薬剤性腎障害; シスプラチン; アポトーシス; ネクローシス; 細胞障害; LLC-PIC_1; DNA断片化; 頂側膜酵素

アポトーシスによる細胞死は遺伝子によってプログラムされた自発的機構であり、個体の発生過程や恒常性維持における役割が明らかにされている。近年、種々の疾患や病態にアポトーシスの関与することが指摘されてきている。我々は既に、シスプラチンによる腎障害の発現にアボトーシスの関与することを示唆した。本研究では、腎障害性薬物の作用部位として重要な近位尿細管細胞のモデル系であるブタ腎由来培養上皮細胞LLC-PK_1を用い、薬剤性腎障害におけるアポトーシス誘導と腎障害発現防御に関する検討を行った。1. アミノグリコシド系抗生物質及び免疫抑制剤シクロスポリンAで処理したLLC-PK_1細胞におけるアポトーシス誘導:コンフルエントに達したLLC-PK_1細胞を種々の濃度のゲンタマイシン及びシクロスポリンAで処理したところ、断片化DNAによるラダーの形成が認められた。同様の条件で処理したLLC-PK_1細胞の核クロマチンを、DNA特異的に結合する蛍光色素を用いて観察したところ、アポトーシスに特徴的なクロマチンの凝集が認められたことから、ゲンタマイシン及びシクロスボリンによってアボトーシスの誘導されていることが明らかになった。同条件下で培養を継続したところ、培養液中へのLDH遊離、及び細胞ホモジネート中の頂側膜酵素活性の低下が認められたが、シスプラチンの場合とは異なり細胞タンパク量の減少は認められなかった。2. 腎障害発現防御に関する検討:還元型グルタチオンはインビボ動物実験において、シスプラチンの腎障害を軽減することが報告されている。そこで、LLC-PK_1細胞をシスプラチンとグルタチオンで同時処理したところ、細胞障害の発現及びアポトーシス誘導は共に抑制されることが明らかになった。

细胞凋亡引起的细胞死亡是由基因编程的自发机制，并且已经阐明了其在发展和维持稳态中的作用。近年来，已经指出凋亡参与了多种疾病和病理学。我们已经提出，垂直毒素与顺铂诱导的肾脏损伤的发展有关。在这项研究中，我们使用了培养的猪肾脏衍生的上皮细胞LLC-PK_1，这是一种近端管状细胞的模型系统，作为肾病药物的作用部位很重要，并研究了药物诱导的肾脏损伤中凋亡的诱导以及预防肾脏损伤的发育。 1。用氨基糖苷抗生素处理的LLC-PK_1细胞诱导凋亡和免疫抑制剂环孢菌素A：当汇合LLC-PK_1细胞用各种浓度的庆大霉素和环孢菌素A处理时，碎片的DNA被碎片形成。使用特异性结合DNA的荧光染料观察到了在相同条件下的LLC-PK_1细胞中的核染色质，并且观察到凋亡的特征，并观察到呈细胞凋亡的特征，并揭示了Avoptosis诱导的庆大霉素和cycrosboline诱导。当在相同条件下继续培养时，LDH释放到培养基中，观察到细胞匀浆中顶膜酶活性的降低，但与顺铂不同，观察到细胞蛋白的量减少。 2。研究预防肾脏损伤的发展：据报道，谷胱甘肽减少可减少顺铂在体内动物实验中的肾脏损伤。因此，当将LLC-PK_1细胞与顺铂和谷胱甘肽共同治疗时，揭示了细胞损伤表达和凋亡诱导均被抑制。