薬剤性腎障害発現におけるアポトーシスの役割に関する研究

细胞凋亡在药物性肾损伤中作用的研究

• 批准号: 09877435
• 负责人: 乾 賢一
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877435/
• 关键词: 薬剤性腎障害; シスプラチン; アポトーシス; ネクローシス; 細胞障害; LLC-PK_1; DNA断片化; 頂側膜酵素

薬剤性腎障害における尿細管細胞死は、これまで、ネクローシス(壊死)と考えられてきた。一方、アポトーシスは、プログラムによる自発的細胞死であり、個体の恒常性維持や生体防御のために必須の機能であると考えられる。そこで、近位尿細管に特有の性質を保持しているブタ腎由来培養上皮細胞LLC-PK_1を用い、腎障害性薬物による障害発現におけるアポトーシス誘導とその役割に関する検討を行った。1.LLC-PK_1細胞のシスプラチン障害におけるアポトーシス誘導とその役割:コンフルエントに達したLLC-PK_1細胞を30μMシスプラチンで処理したところ、24時間後、既にヌクレオソーム単位ごとのDNA断片化及び核クロマチン凝集が認められ、アポトーシスの誘導されていることが明らかとなった。さらに、同条件で培養を継続したところ、培養液中へのLDH遊離、並びに細胞ホモジネート中の頂側膜酵素活性の低下が認められ、障害の発現が確認された。さらに、シスプラチンとグルタチオンとの同時処理を行ったところ、細胞障害及びアポトーシス誘導は共に抑制された。したがって、シスプラチンによるアポトーシス誘導は、細胞障害発現と関連することが示唆された。一方、高濃度(1mM)のシスプラチンでLLC-PK_1細胞を処理したところ、12時間以内に障害の発現が認められたが、DNA断片化及び核クロマチンの凝集は認められなかったことから、高濃度シスプラチン処理における障害発現はネクローシスによることが推察された。2.他の腎障害性薬物によるアポトーシス誘導:他の腎障害性薬物であるゲンタマイシン、シクロスポリンAで24時間処理した場合にも、DNA断片化が認められたことから、種々の薬剤性腎障害の発現にアポトーシスの関与する可能性が示唆された。

在药物诱导的肾损伤中的管状细胞死亡先前被认为是坏死。另一方面，凋亡是一种程序性自发的细胞死亡，被认为是维持单个稳态和保护生物体的重要功能。因此，我们研究了使用培养的上皮细胞LLC-PK_1的肾脏病毒及其作用的凋亡诱导，该药物保留了近端小管所特有的特性。 1。在LLC-PK_1细胞中诱导顺铂损伤中凋亡及其作用：当24小时后24小时用30μM顺铂治疗已达到汇合的LLC-PK_1细胞时，DNA片段化和核染色质聚集已经观察到每个核小体单元，揭示了颗粒体的孔子。此外，当在相同的条件下继续培养时，LDH释放到培养基中，并观察到细胞匀浆中的顶膜酶活性的降低，从而证实了该疾病的表达。此外，当同时处理顺铂和谷胱甘肽时，抑制了细胞毒性和凋亡诱导。因此，有人提出顺铂诱导凋亡与细胞毒性表达有关。另一方面，当用高浓度（1 mm）的顺铂处理LLC-PK_1细胞时，在12小时内观察到该疾病的表达，但未观察到DNA片段化或核染色质聚集，并推断出在高浓度的顺铂治疗期间导致疾病在高浓度下由Necrisos引起了疾病。 2。其他肾病药物诱导细胞凋亡：当用其他肾病药物庆大霉素和环孢菌素A治疗24小时时，还观察到DNA碎片化，这表明细胞凋亡可能参与各种药物诱导的肾脏损害的发展。

项目成果

T.Nakamura: "Renal excretion of vancomycin in rats with acute renal failure." J.Pharm.Pharmacol.49(2). 154-157 (1997)

T.Nakamura：“急性肾衰竭大鼠中万古霉素的肾排泄。”

M.Okuda: "Characterization of organic ion transporters involved in renal excretion of xenobiotics." Jpn.J.Physiol.47(S1). S58-S59 (1997)

M.Okuda：“参与异生物质肾脏排泄的有机离子转运蛋白的表征。”

J.Nagai: "Inhibition of PAH transport by parathyroid hormone in OK cells:involvement of protein kinase C pathway." Am.J.Physiol.273(5). F674-F679 (1997)

J.Nagai：“甲状旁腺激素在 OK 细胞中抑制 PAH 转运：蛋白激酶 C 途径的参与。”