权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

部位特異的組換え系を用いた染色体工学技術の開発

利用位点特异性重组系统开发染色体工程技术

基本信息

批准号：
01480064
负责人：
大嶋泰治
金额：
$ 4.42万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至 1991
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでに、出芽酵母(Saccharomyces cerevisiae)の染色体上に大きな欠失と逆位の導入、非相同染色体間の組換え及び一染色体細胞の造成に成功した。本年度は、以下の4項目についての進展があった。1)第XV染色体右腕セントロメア近傍にあるとされていたPHO80遺伝子と、同じ右腕上でそれか3120cM離れたHIS3の間で欠失の造成を試みたところ、予想に反して、PHO80座がセントロメア近傍右腕にあることが分かり、本操作で約360kbの環状染色体が得られることを確認した。2)同様にして非相同染色体間の組換えにより、新発見のTUB3ーPHO84ーGTR13遺伝子の相対的位置について、GTR1がセントロメア側と決定した。3)出芽酵母と分裂酵母Schizosaccharomyces pombe間で雑種染色体の造成を試みた。分裂酵母の染色体DNAをアガロ-ズビ-ズ法で調製し、制限酵素MluIで部分分解し、特異的組換え部位DNA断片(RS断片)を持つYAC(酵母人工染色体)ベンタ-に結合し、第XIII染色体左腕にあるPHO84遺伝子座にRS断片をもつ出芽酵母細胞に導入した。この細胞内で組換え酵素R生産プラスミドを発現させると、組換えYACベクタ-と第XIII染色体間で組換えが起こり、約100kbの分裂酵母染色体DNAを結合した染色体が得られた。4)植物への応用を目指して、βーglucuronidase遺伝子(GUS)を挾むようにRS断片を互いに逆向きに2ヶ結合たプラスミドと、カリフラワ-モザイクウイルス35Sプロモ-タ-を結合したR組換え酵素遺伝子をタバコ培養細胞へ導入した。また、GUS遺伝子とブロモ-タ-間に、2.3kbのDNA断片の両側にRSを同方向に結合して挿入した構造体をタバコ培養細胞の染色体に挿入した。いずれの場合も、R酵素により高頻度で組換えが起こることがGUS遺伝子の発現で検出され、プラスミドあるいは染色体の改変が行われることを確かめた。

It can be used for the introduction of large defects and inversion of chromosomes in budding yeast (Saccharomyces cerevisiae), the replacement of non-identical chromosomes and the success of cells with one chromosome. This year, the following 4 projects have made progress. 1) Right wrist of chromosome XV子と、同じOn the right wrist, でそれか3120cM 里れたHIS3の间で気のcause をtrialみたところ, I think it's the opposite, PHO80 seat がセントロメア near the right wrist にあるこIn this operation, the circular chromosome of about 360kb was confirmed. 2) The same chromosome but not the same chromosome, the replacement of the same chromosome, the new TUB3 PHO84 The position of GTR13's remaining partner is determined, and the position of GTR1's remaining partner is determined. 3) There is no test between budding yeast and fission yeast Schizosaccharomyces pombe. The chromosomal DNA of fission yeast is prepared by the method of ズビ-ズ, the restriction enzyme MluI is partially decomposed, and the specific replacement part DNA fragment (RS fragment) is maintained. YAC (Yeast Artificial Chromosome) conjugation, PHO84 left arm of chromosome XIII, RS fragment, and introduction into budding yeast cells. Intracellular enzyme R production enzyme R production, group replacement YAC enzyme-と Chapter XIII The inter-chromosome replacement is done, and the fission yeast chromosomal DNA of about 100kb is combined and the chromosome is obtained. 4) Plant への応 is combined with して, βーglucuronidase residue (GUS) を抟むようにRS fragment をmutual いにreverse きに2ヶたプラスミドと、カリフラワ-モザイクウイルス 35S プロモ-タ-を Combined したR group replacement え enzyme left 伝子をタバコ cultured cells へ introduced した.また, GUS legacy とブロモ-タ-between, 2.3kb DNA fragment の両side RSを same direction and insertion into the chromosome of the structure をタバコ cultured cells.いずれのoccasionも, R enzyme によりHigh frequency で Group replacement えがrise こることがGUS 伝子の発appearで検出され、プラスミドあるいはChromosomeのchange変が行われることを正かめた.