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細菌の細胞外分泌型氷核活性蛋白質の分子クローニングと構造解析

細菌の細胞外分泌型氷核活性蛋白質の分子クローニングと構造解析
细菌胞外分泌冰核蛋白的分子克隆及结构分析
批准号：
05660084
负责人：
荒井 綜一
金额：
$1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1993 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05660084/
关键词：
氷核細菌氷核蛋白質Erwinia uredovoraゲノムDNA

项目摘要

项目成果

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Erwinia uredovoraは小幡らによりイチゴの葉より単離された氷核活性細菌である。この氷核細菌は氷核物質を菌体外に放出する点が既知の氷核細菌とは異なっていた。そこでこの氷核細菌の氷核蛋白質をコードする遺伝子のクローニング及び全塩基配列の決定をした。Erwinia uredovoraゲノムDNAをフェノール法により抽出し、制限酵素Sau3AIにより部分消化した。ファージベクターλEMBL3へ導入しゲノムライブラリーを得た。プローブ作製のため、既に単離・解析されているErwinia ananasの氷核蛋白質の遺伝子であるinaAのNドメイン・Cドメイン領域の配列をもとに、センス・アンチセンスのオリゴヌクレオチドプライマー(40mer)をそれぞれ合成し、Erwinia uredovoraゲノムDNAを鋳型にPCRによりフラグメントを作製した。これをプローブとして先のゲノムライブラリーをスクリーニングした結果、全長をコードすると思われるλinaU22クローンを得た。このクローンをプラスミドベクターpUC18へサブクローニングし大腸菌に組み込んだところ、その大腸菌は強い氷核活性(T_<50>=-4.5℃)を示し、λina22が氷核蛋白質をコードする遺伝子であることが判明し、この遺伝子をinaUと命名した。そこで全塩基配列の解析をジデオキシターミネーター法により行った。その結果、inaUは3102塩基よりなり、推定されるアミノ酸は1034個であった。氷核細菌に共通に見られるRドメインの繰り返し配列をはじめNドメイン・Cドメインを有し既知の氷核蛋白質と非常に相同性が高いことが明らかとなった。しかしRドメインのアミノ酸残基数は832個と、解析された氷核蛋白質の中で最小であった。
期刊论文(8)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Watanabe,M: "Isolation and cultivation of anovel ice nucleation-active strain of Xanthomonas campestris." Biosci.Biotech.Biochem.57. 994-995 (1993)
Watanabe，M：“野油菜黄单胞菌新型冰核活性菌株的分离和培养。”
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Abe,K: "An ice nucleation active gene of Erwinia ananas:sequence similarity to those of Pseudomonas species and regions required for ice nucleation activity." FEBS Lett.258. 297-300 (1989)
Abe，K：“Erwinia ananas 的冰核活性基因：与假单胞菌属物种和冰核活性所需区域的序列相似性。”
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Arai,S: "Molecular cloning of an ice nucleation gene from Erwinia ananas and its expression in Escherichia coli." FEMS Microbiol.Lett.61. 53-56 (1989)
Arai,S：“菠萝欧文氏菌冰核基因的分子克隆及其在大肠杆菌中的表达。”
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Watabe,S: "Large-scale production and purification of an Erwinia ananas ice nucleation protein and evalution of its ice nucleation activity." Biosci.Biotech.Biochem.57. 603-606 (1993)
Watabe，S：“菠萝欧文氏菌冰核蛋白的大规模生产和纯化及其冰核活性的评估。”
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
機能性食品の解析と分子設計
  • 批准号：
    04265103
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $127.23万
  • 财政年份：
    1995
  • 负责人：
    荒井 綜一
  • 依托单位：
    The University of Tokyo
フィトシスタチンの昆虫生育抑止効果の検証と耐虫イネの分子育種
  • 批准号：
    07556072
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research (B)
  • 资助金额：
    $6.4万
  • 财政年份：
    1995
  • 负责人：
    荒井 綜一
  • 依托单位：
    The University of Tokyo
食品の味覚の受容とシグナル伝達に関する分子生物学的解析
  • 批准号：
    07456058
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
  • 资助金额：
    $4.29万
  • 财政年份：
    1995
  • 负责人：
    荒井 綜一
  • 依托单位：
    The University of Tokyo
ヒト味覚レセプターの構造の解析と発現糸の設計に関する分子生物的研究
  • 批准号：
    06660150
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
  • 资助金额：
    $1.28万
  • 财政年份：
    1994
  • 负责人：
    荒井 綜一
  • 依托单位：
    The University of Tokyo
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