イネ種子システインプロテイナーゼインヒビターの構造と植物生理学的機能の解析

水稻种子半胱氨酸蛋白酶抑制剂结构及植物生理功能分析

• 批准号: 62219005
• 负责人: 荒井 綜一
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Special Project Research
• 财政年份: 1987
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1987 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62219005/
• 关键词: オリザシスタチン; 構造と機能; 植物生理機能; システインプロテイナーゼインヒビター

イネ種子中に成熟型の貯蔵タンパク質が蓄積されるまでにはプロ型のタンパク質のプロセシングを経る. また, 貯蔵タンパク質は種子の発芽過程で迅速に分解される. これらには当然プロテイナーゼが関与する. 筆者らは, イネ発芽種子からグルテリンを効率よく分解するプロティナーゼを精製し, EC3, 4, 22に属するSH酵素であることを明らかにするとともに, これを特異的に阻害するタンパク質がやはりイネ種子中に存在することを見いだし, オリサシスタチンと命名した.本年度は, イネ種子中でのプロテオリシスの制御因子と考えられるオリザシスタチンの構造・活性相関の解明を主要な研究課題とした. 東京大学田無農場から開花後2週間のイネ(日本晴)の穂を入手し, mRNAを抽出し, 逆転写によってcDNAライブラリーを作製した. オリザシスタチンの部分一次構造の解析に基づいて合成した2種類のオリゴヌクレオチドを用い, ハイブリダイズするcDNAクローンをこのライブラリーから得た. その全塩基配列の決定によって推定されるオリザシスタチンの一次構造は動物起源のシスタチン類と高度の相同性をもつのみならず, 共通配列QVVAGを保存していた. 次いで, cDNAを大腸菌で発現させる系を確立し, 5′および3′-deletion mutantsからN-およびC-truncated oryzacystatinsをfusion proteinsとして得た. それぞれのパパイン阻害活性を測定したところ, N端から38番目までのアミノ酸残基を欠くmutant OC-26-5′-39およびC端から35番目までのアミノ酸残基を欠くmutant OC-26-3′-67では活性が著しく低下しており, オリザシスタチンが十分に活性を発現するためにはQVVAGを含むある程度以上の長さのペプチド鎖が必要であると結論された.

The mature type of seed is stored in the seed, and the reverse type of seed is stored in the seed. In addition, the storage material is rapidly decomposed during seed germination. This is the first time I've seen you. The author of this paper proposes a method for the purification of germinating seeds, EC 3, 4, 22, belonging to SH enzyme, EC3, 4, 22, EC3, EC 4, EC 2, EC3, EC 3, EC 4, EC 2, EC 3, EC 3, EC 4, EC 22, EC 3, EC 2, EC 3, EC 2, EC 3, EC 3, EC 4, EC 22, EC This year, the main research topic is to investigate the structure and activity related factors in the development of seeds. Tokyo University Tamo Farm began to bloom 2 weeks after flowering, mRNA was extracted, and cDNA was reprogrammed. The analysis of partial primary structure of the gene was carried out based on the synthesis of two kinds of genes. The determination of the total base alignment of the QVAG is based on the estimation of the primary structure of the QVAG and the similarity of the animal origin and the height of the QVAG. In addition, the development of cDNA in E. coli was well established, with 5′-deletion mutants from N-and C-truncated oryzacystatins to fusion proteins. The activity of mutant OC-26-5′-39 ′-39 ′-35 ′-67 ′-67 ′-38 ′-39 ′-39 ′-35 ′-67 ′-67 ′-38 ′-39 ′-39 ′-67 ′-67 ′-39 ′-39 ′-67 ′-39 ′-39 ′-67 ′-67 ′-39 ′-67 ′-67 ′-38 ′-39 ′-39 ′-67 ′-67 The results show that:

项目成果

K.Abe et al.: J.Biol.Chem.(1988)

K.Abe 等人：J.Biol.Chem.(1988)

K.Abe et al.: J.Biol.Chem.262. 16793-16797 (1987)

K.Abe 等人：J.Biol.Chem.262。

K.Abe et al.: Agric.Biol.Chem.51. 1509-1514 (1987)

K.Abe 等人：Agric.Biol.Chem.51。

K.Abe and S.Arai: Agroic.Biol.Chem.,. 49. 3349-3350 (1985)

K.Abe 和 S.Arai：Agroic.Biol.Chem.,。

K.Abe et al.: Agric.Biol.Chem.51. 2763-2768 (1987)

K.Abe 等人：Agric.Biol.Chem.51。