水稻种子中蛋白质类半胱氨酸蛋白酶抑制剂的结构与生理功能分析-猫眼课题宝

水稻种子中蛋白质类半胱氨酸蛋白酶抑制剂的结构与生理功能分析

批准号：

61560091

负责人：

荒井綜一

金额：

$1.02万

依托单位：

The University of Tokyo

依托单位国家：

日本

项目类别：

Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)

财政年份：

1986

资助国家：

日本

项目状态：

已结题

起止时间：

1986 至 --

来源：

https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61560091/

关键词：

コメシステインプロテイナーゼインヒビターモノクローナル抗体

项目摘要

项目成果

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英文摘要

コメ種子の発芽の抑制に関与していると考えられるシステインプロテイナーゼインヒビター(CPI)を最終精製段階にHPLCを用いて分離・精製した。分子量はSDS-ゲル電気泳動から11500,ゲル濾過では12000と推定され、等電点は53であった。pHに対する安定性は、pH2から9まではほぼ安定であるが、アルカリ条件下では不安定であった。また、加熱に対する安定性は100℃、30分間の加熱処理では活性を100%保持し、120℃では約60%活性が低下したが熱に強いものであることが判明した。このCPIをラビットに免疫することによりポリクローナル抗体を得、種子の登熟・発芽の過程におけるCPIの消長をELISA法で検討したところ、CPIは登熟過程においては開花後4週目で種子の貯蔵タンパク質に先だって生合成され、発芽過程においては発芽後3週目でほぼ消失することが判明した。また様々なコメの品種によるCPIの含量をELISA法で同様に検討したところ、早生のウルチ品種に含量が高く、モチゴメ品種に低いことが分った。さらに酵素抗体染色法を用いて種子中でのCPIの局在を調べたところ胚乳部に多く存在することが確認された。このCPIは加熱履歴と共に活性は減少するが、それに反してELISA法でみた抗体との結合能は増加し、120℃30分間加熱処理した後では結合能が約6倍増加する結果となった。また活性部位の構造を調べる目的で、BALB/CマウスにCPIを免疫し、同じマウス由来のミエローマ細胞と隔合させ、20種類のモノクローナル抗体を得た。サブクラスはIgMのものが15種類、Ig【G_1】が2種類、Ig【G_(2a)】が1種類、Ig【G_(2b)】が2種類であった。その20種類のうちCPIの反応部位を認識する抗体が1つ見つかった。

期刊论文(1)

专著(0)

科研奖励(0)

会议论文

Keiko Abe;Hiroto Kondo;Soichi Arai: Biochim.Biophys.Acta.

阿部惠子；近藤博人；荒井宗一：生物化学学报。

DOI： --

发表时间：

期刊：

影响因子： --

作者：

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