受容体遺伝子導入細胞を用いたCa動員系とcAMP阻害系のクロストークの研究

使用受体基因转染细胞研究 Ca 动员系统和 cAMP 抑制系统之间的串扰

• 批准号: 05670084
• 负责人: 正 公枝
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 1994
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670084/
• 关键词: CHO細胞; アデノシン受容体; ムスカリン受容体; 遺伝子導入; ホスホリパーゼC; アデニル酸シクラーゼ; ホスホリパーゼA2; 百日咳毒素感受性

我々の最近の研究により、ホスホリパーゼC促進性(Ca動員性)シグナルとアデニル酸シクラーゼ阻害性シグナルを同時に与えると二つの細胞膜情報伝達系の間に相互作用が起こり、アデニル酸シクラーゼ阻害性シグナルによってホスホリパーゼCしたがってCa動員作用が増強されると言う一般的クロストーク機構があるらしいことが明らかになった。本研究は既知の遺伝子を導入、発現させることにより、この機構に関与する受容体その他の分子を同定、解析しようとしたものである。本研究の成果は次のとおりである。Chinese hamstar ovary細胞(CHO)にA1タイプのアデノシン受容体とタイプ3ムスカリン(M3)受容体の遺伝子cDNAを導入して二つの受容体とカップルした情報伝達系の相互作用を調べた。カルバコールはM3受容体を発現させた細胞でホスホリパーゼCを活性化し、細胞内のCaイオン濃度を上昇させた。アデノシンはA1受容体を発現させた細胞でホルスコリンによるcAMP産生を阻害した。両受容体を発現させた細胞では、アデノシンはアデニル酸シクラーゼを阻害したばかりでなく、カルバコールとともに加えるとホスホリパーゼCの促進作用を示した。更に同じ条件でホスホリパーゼA2によるアラキドン酸生成も促進したが、これらのアデノシン作用は全て百日咳毒素処理により完全に消失した。以上の結果は、元々両受容体をもっている細胞で起こる現象を完全に再現しており、A1タイプのアデノシン受容体という一種類の分子が一種類のG蛋白質を介して3つの効果器酵素とカップルしていることを証明した。なお、これらのクロストーク機構に関与するG蛋白質の分子種を同定するためにセンス及びアンチセンス遺伝子を導入し安定した効果を示す細胞を得る条件を検討中であるが、なお充分な成果をあげるに至らず現在研究続行中である。

I 々 の の recent study に よ り, ホ ス ホ リ パ ー ゼ C promote sex mobilization (Ca) シ グ ナ ル と ア デ ニ ル acid シ ク ラ ー ゼ resistance against sexual シ グ ナ ル を に and え る と two つ の に interaction between intelligence 伝 of cell membrane is の が up こ り, ア デ ニ ル acid シ ク ラ ー ゼ resistance against sexual シ グ ナ ル に よ っ て ホ ス ホ リ パ ー ゼ C し た が っ て Ca The role of personnel is が to enhance されると words う the general <s:1> ロスト <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> があるら があるら institutions があるら が とが とが とが とが とが mingら ロスト になった. This study は already know の heritage 伝 を import, 発 now さ せ る こ と に よ り, こ の institutions に masato and す る by let body そ の set with his を の molecules, and parse し よ う と し た も の で あ る. The <s:1> results of this study are とお times とお である. Chinese hamstar ovary (CHO) cells に A1 タ イ プ の ア デ ノ シ ン by let body と タ イ プ 3 ム ス カ リ ン (M3) by the capacity of body の posthumous son 伝 cDNA を import し て two つ の by let body と カ ッ プ ル し た intelligence 伝 da is の interaction を adjustable べ た. カ ル バ コ ー ル は M3 by let body を 発 now さ せ た cells で ホ ス ホ リ パ ー ゼ C を activeness し, intracellular の Ca イ オ ン concentration rising を さ せ た. The アデノシ <s:1> A1 acceptor を is present in the させた cell でホ スコリ スコリ による による によるcAMP, which causes を inhibition of た. Struck by the capacity of body を 発 now さ せ た cells で は, ア デ ノ シ ン は ア デ ニ ル acid シ ク ラ ー ゼ を resistance against し た ば か り で な く, カ ル バ コ ー ル と と も に plus え る と ホ ス ホ リ パ ー ゼ を C の promote role し た. More に conditions with じ で ホ ス ホ リ パ ー ゼ A2 に よ る ア ラ キ ド ン acid generation も promote し た が, こ れ ら の ア デ ノ シ ン role は て pertussis toxin 処 manage all に よ り に disappear completely し た. の above results は, yuan 々 struck by the capacity of body を も っ て い る cell で こ る phenomenon を に completely reproduce し て お り, A1 タ イ プ の ア デ ノ シ ン by let body と い う a number of species is の G protein molecules の が を interface し て 3 つ の unseen GuoQi enzyme と カ ッ プ ル し て い る こ と を prove し た. な お, こ れ ら の ク ロ ス ト ー ク institutions に masato and す る の G protein molecules of を with fixed す る た め に セ ン ス and び ア ン チ セ ン ス posthumous son 伝 を import し settle し た unseen fruit を す cells を may る conditions を 検 beg in で あ る が, な お な results fully を あ げ る に to ら ず now research 続 line で あ る.

项目成果

Okajima,F.: "Enkephalin activates phospholipase C-Ca^<2+> system through a cross talk between opioid receptors and P_2-purinergic or bradykinin receptors in NG 108-15 cells." Biochem.J.290. 241-247 (1993)

Okajima,F.：“脑啡肽通过 NG 108-15 细胞中阿片受体与 P_2-嘌呤能或缓激肽受体之间的串扰来激活磷脂酶 C-Ca^2 系统。”

M.A.Majid: "UTP activates phospholipase C-Ca^<2+> system through a receptor different from the 53-kDa ATP receptor in PC12 cells" Biochem.Biophys.Res.Commun. 195. 415-421 (1993)

M.A.Majid：“UTP通过与PC12细胞中53-kDa ATP受体不同的受体激活磷脂酶C-Ca ^ 2 系统”Biochem.Biophys.Res.Commun。

Hidaka,A.: "Receptor cross-talk can optimize assays for autoantibodies to the thyrotropin receptor: effect of phenylisopropyladenosine on adenosine 3',5'-monophosphate and inositol phosphate levels in rat FRTL-5 thyroid cells." J.Clin.Endocrinol.Metab.77.

Hidaka,A.：“受体串扰可以优化促甲状腺素受体自身抗体的测定：苯基异丙基腺苷对大鼠 FRTL-5 甲状腺细胞中 3,5-单磷酸腺苷和磷酸肌醇水平的影响。”

近藤洋一: "甲状腺ホルモンの生合成と分泌「最新内科学大系13,甲状腺疾患」" 中山書店, 18 (1993)

近藤洋一：“甲状腺激素的生物合成和分泌‘最新内科13，甲状腺疾病’”中山书店，18（1993）

Kosugi,S.: "Mutation of alanine 623 in the third cytoplasmic loop of the rat thyrotoropin(TSH)receptor results in a loss in the phosphoinositide but not cAMP signal induced by TSH and receptor autoantibodies." J.Biol.Chem.267. 24153-24156 (1992)

Kosugi,S.：“大鼠促甲状腺素 (TSH) 受体第三个细胞质环中丙氨酸 623 的突变会导致磷酸肌醇丢失，但不会导致 TSH 和受体自身抗体诱导的 cAMP 信号丢失。”