心筋虚血再潅流障害の分子機構の解明および接着分子タンパクを用いた予防法の確立

阐明心肌缺血再灌注损伤的分子机制并建立粘附分子蛋白预防方法

• 批准号: 05670596
• 负责人: 世古 義規
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670596/
• 关键词: 心筋虚血再潅流障害; 接着分子; 血管内皮細胞; 細胞内情報伝達系

1.(1)ラットの左冠動脈を30分間結紮後解除することにより心筋虚血再潅流モデルを作成し、selectin familyの接着分子であるE-selectinの合成オリゴペプチドを(2mg/Kg)虚血直前に静注して48時間後に屠殺。心筋壊死量を、生食を投与したコントロール群と比較検討したところ、全心筋組織に対する心筋壊死巣の割合は、コントロール群で35.81±2.45%(mean±SD,n=9)であったのに対し、オリゴペプチド投与群では、13.11±8.35%(n=9)であり、有意(p<0.01)の減少が認められた。(2)培養ヒト血管内皮細胞におけるP-selectinの発現は、刺激前にはほとんど認めなかったが、低酸素負荷後再酸素化刺激により90分後をピークとして著明な発現の増強を認めた。以上の結果から、心筋虚血再潅流により、短時間のうちに血管内皮細胞上にP-selectinが発現されることによって、好中球による接着・心筋障害に重要な役割を果していると考えられ、selectinの合成オリゴペプチドのin vivo投与は虚血再潅流障害の予防に有効であると考えられた。2.ラットの培養心筋細胞を用いて、低酸素負荷、また60分間低酸素負荷後再酸素化を行なった。それぞれ経時的に細胞質内のタンパク質を回収し、p21^<ras>、MAPキナーゼ・キナーゼ・キナーゼ、MAPキナーゼ、S6キナーゼ、Raf-1キナーゼのリン酸化について、特異抗体・特異的基質を用いたimmune complex kinase assay、ゲル内リン酸化、Western blot法等により解析した。低酸素負荷刺激および低酸素負荷後再酸素化刺激ともに、p21^<ras>のGDP結合型からGTP結合型への変換→MAPキナーゼ・キナーゼ・キナーゼのリン酸化→MAPキナーゼのリン酸化→S6キナーゼのリン酸化・Raf-1キナーゼのリン酸化という一連のリン酸化カスケードによる情報伝達系キナーゼの活性化が認められた。

1. (1)The left coronary artery was ligated for 30 minutes and then released. The selectin family was synthesized. The selectin family was injected intravenously for 48 minutes and then killed. The total number of heart muscle cells, the total number of heart muscle cells, and the total number of heart muscle cells were 35.81±2.45%(mean±SD,n=9) and 13.11±8.35%(n=9) respectively. (2)The expression of P-selectin in cultured vascular endothelial cells was increased before stimulation and after 90 minutes of re-acidification after low acid loading. The above results show that P-selectin is produced on vascular endothelial cells in a short time, and then P-selectin is synthesized in vivo and prevented from re-bleeding due to cardiac muscle deficiency. 2. The cultured cardiac muscle cells were treated with low acid load, and then treated with low acid load for 60 minutes. The analysis of cytosolic protein in the serum was carried out by p21^<ras>, MAP, Raf-1, immune complex kinase assay, Western blot, etc. Low acid load stimulation and low acid load after the re-acidification of stimulation, p21^<ras>GDP binding type change → MAP

项目成果

山崎力 他3名: "(Immunotherapy and reperfusion injury in the heart)Immunopharmacology of the Heart" Curtis MJ(ed).Academic Press, 146 (1993)

Tsutomu Yamazaki 和其他 3 人：“（心脏的免疫治疗和再灌注损伤）心脏的免疫药理学”Curtis MJ（编）。学术出版社，146（1993）

山崎力 他7名: "Expression of intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1)in rat heart with ischemia/reperfusion and limitation of infarct size by treatment with antibodies against cell-adhesion molecule." Am J Pathol. 143. 410-418 (1993)

Tsutomu Yamazaki 和其他 7 人：“细胞间粘附分子 1 (ICAM-1) 在缺血/再灌注大鼠心脏中的表达以及通过细胞粘附分子抗体治疗限制梗死面积。”143。410-。 418 (1993)

奥村康 他3名: "(The effect of anti-cell-adhesion molecules on experimental cardiac injury)Intractable Vasculitis Syndromes" Tanabe T(ed).Hokkaido Univ Press, (1993)

Yasushi Okumura 等 3 人：“（抗细胞粘附分子对实验性心脏损伤的影响）顽固性血管炎综合征”Tanabe T（编）。北海道大学出版社，（1993）

世古義規 他10名: "Perforin-secreting killer cell infiltration and expression of a 65-KD heat-shock protein in aortic tissue of patients with Takayasu's arteritis." J Clin Invest. (印刷中).

Yoshinori Seko 和其他 10 人：“Takayasu 动脉炎患者主动脉组织中穿孔素分泌杀伤细胞的浸润和 65-KD 热休克蛋白的表达（正在出版）。”

山崎力 他7名: "Mechanical loading activates mitogen-activated protein kinase and S6 peptide kinase in cultured rat cardiac myocytes." J Biol Chem. 268. 12069-12076 (1993)

Tsutomu Yamazaki 和其他 7 人：“机械负荷激活培养的大鼠心肌细胞中的丝裂原激活蛋白激酶和 S6 肽激酶。”J Biol Chem。268。12069-12076 (1993)