造血細胞特異的受容体型チロシンキナーゼ,ltkに対する増殖因子と生理的意義の解析

造血细胞特异性受体酪氨酸激酶ltk的生长因子及生理意义分析

• 批准号: 05670898
• 负责人: 豊島 秀男
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670898/
• 关键词: ヒトltk遺伝子; レセプター型チロシンキナーゼ; 細胞内シグナル伝達機構; ltk蛋白質; リン酸化蛋白

本研究で我々は正常ヒトltk遺伝子を単離し、その構造を解析した結果、ltk cDNAクローンの一つがレセプター型チロシンキナーゼをコードすることを明らかにした。また、ヒトltk蛋白質の細胞内シグナル伝達機構の解明の手がかりとして、ltk蛋白質の細胞内結合蛋白の探索を行った。今回の実験結果から、以下のことが明かとなった。1)ヒト胎盤cDNAライブラリーより得られたヒトltk cDNAクローンの一つが、424アミノ酸の細胞外ドメインを有するレセプター型チロシンキナーゼをコードすることを明らかにした。さらに興味深いことに代表的な5つのcDNAクローンの遺伝子構造の解析の結果、alternative splicingによりコーディング領域に違いのある少なくとも3種類以上のmRNAが発現していることが明かとなった。これらのcDNAは、ltk遺伝子産物として、レセプター型チロシンキナーゼ、チロシンキナーゼ部位を欠くレセプター、可溶性のレセプター蛋白が存在することを示唆している。2)ヒトltk蛋白質は、抗ヒトltkペプチドモノクローナル抗体及び、抗リン酸化チロシン抗体によりCOS-1細胞において分子量100kDaのリン酸化蛋白として検出された。抗ltkモノクローナル抗体で免疫沈降し、Immune complex kinase Assayを行うと、100kDaのltk自己リン酸化蛋白と複数のリン酸化された蛋白が検出された。各特異抗体を用いてウエスタンブロッティングの解析により、これらのcomplexを形成する蛋白には、PLC-γ1、GAP、PI3K(p85サブユニット)、c-rafが含まれることが明らかとなった。これまでltk蛋白質の細胞内シグナル伝達系の報告は無く、本研究でヒトltk蛋白質の細胞内結合蛋白が明かにされたことはltk蛋白質の細胞内シグナル伝達機構を解明するにあたって意義深い。今後ltk蛋白質の未知のリガンドが同定されることでltk蛋白質の細胞内シグナルが細胞の増殖分化に果たす役割や、リガンド依存的なltk蛋白質の細胞内シグナル伝達機構が解明されることが期待される。

In this study, we analyzed the structure of ltk cDNA, and found that ltk cDNA can be used as a template for gene expression. To explore the mechanism of intracellular expression of ltk protein and its binding protein This time around, the results are different, and the following are different. 1) The cDNA library of the human embryo disk has been developed to provide a complete set of 424 amino acid and extracellular DNA. The results of analysis of cDNA fragments and alternative splicing of more than 3 kinds of mRNA were analyzed. The cDNA, ltk gene product, and soluble protein are shown to exist in all regions of the genome. 2) Ltk protein, anti-Ltk protein, anti-Ltk Anti-ltk antibodies were detected by immunoprecipitation, Immune complex kinase Assay, 100kDa ltk self-acidified protein and complex acidified protein. Each specific antibody is used to analyze the protein, PLC-γ1, GAP, PI3K (p85) and c-raf. This study is of great significance in clarifying the intracellular binding protein of ltk protein and its mechanism. In the future, the intracellular structure of ltk protein is expected to be clarified as a result of the differentiation and differentiation of cells.

项目成果

Kozutsumi H: "Identification of the human ltk gene product in placenta and hematopoietic cell lines.Biochem." Biophys.Res.Commun.190. 674-679 (1993)

Kozutsumi H：“胎盘和造血细胞系中人类 ltk 基因产物的鉴定。Biochem。”

Ogawa S: "Detection of the PML/RARa fusion gene in acute promyelocytic leukemia with a complex translocation involving chromosome 15,17,and 18." Cancer Genet.Cytogenet.69. 113-117 (1993)

Okawa S：“急性早幼粒细胞白血病中 PML/RARa 融合基因的检测，涉及 15、17 和 18 号染色体的复杂易位。”

Toyoshima H: "Differently spliced cDNAs of human ltk receptor tyrosine kinase predict receptor proteins with and without tyrosine kinase domain and a soluble receptor protein." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 90. 5404-5408 (1993)

Toyoshima H：“人类 ltk 受体酪氨酸激酶的不同剪接 cDNA 预测具有或不具有酪氨酸激酶结构域的受体蛋白以及可溶性受体蛋白。”

Sugimoto K: "Mutations of the p53 gene in myelodysplastic syndromes and MDS-derived leukemia." Blood. 81. 3022-3026 (1993)

Sugimoto K：“骨髓增生异常综合征和 MDS 衍生性白血病中的 p53 基因突变。”