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運動ニューロンに特異的に発現されるレセプター型チロシンキナーゼの機能解析

运动神经元特异表达的受体酪氨酸激酶的功能分析

基本信息

批准号：
07264234
负责人：
田中英明
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07264234/
关键词：
運動ニューロンレセプターチロシンキナーゼ細胞死栄養因子 Ret Sek

项目摘要

運動ニューロンにおける細胞死をBDNFやNT-3がある程度阻止することから、BDNFやNT-3が運動ニューロン栄養因子として働いていると考えられるが、他の栄養因子が存在する可能性もある。我々は、運動ニューロンを特異的に認識する抗体を用いて運動ニューロンを精製し、RT-PCR法により運動ニューロンに特異的に発現するレセプター型チロシンキナーゼ群をクローニングした。その中で、BDNF、NT-3のレセプターであるTrkファミリーとは異なるEphレセプター型チロシンキナーゼファミリーに含まれるSekが、肢を支配する運動ニューロンと肢芽に特異的に、さらに運動ニューロン細胞死の時期(E5〜E10)に一致して一過性に発現していること、またRetプロトオンコジーンが後期胚から成鶏にかけて運動ニューロンに強く発現していることを見い出した。平成7年度には、マウスELF-1がSekに結合することからリガンドであると報告されたため、我々もトリのELF-1をクローニングしCOS細胞に発現させたが、3T3に発現したSekを反応させるとSekと反応させてもSekがリン酸化しないことからリガンドではないと判断した。ところが、ELF-1を発現している細胞株として報告されたラット肝由来のBRLとSekはリン酸化することから、BRLには真のSekリガンドが発現していると考えられた。BRLからmRNAを抽出し、RT-PCRによりEphレセプターのリガンドファミリーをクローニングしたところ、これまで報告されていない新規のリガンドcDNAを見い出し、Sekのリガンドであるかどうか検討している。Retは発生後期から成体にかけて機能していることが期待されるため、ヒヨコの座骨神経切断による発現変化を解析した。運動ニューロン細胞体では除神経1日で僅かに増加し、その後減少し、2週間で再度増加した。一方、座骨神経の切断遠位部では、切断後3日より増加し、低親和性NGFレセプター発現変化と類似していた。これらのことから、Retも運動ニューロンの再生・維持に働いていることが期待される。

The degree of cell death due to exercise and BDNF and NT-3 inhibition may be related to the possibility that BDNF and NT-3 may exist as exercise and NT-3 trophic factors. We use the method of RT-PCR to purify the antibodies specific to sports. We use the method of RT-PCR to detect the antibodies specific to sports. The expression of BDNF and NT-3 in the middle and lower part of the cell is consistent with the transient expression of BDNF and NT-3 in the middle and lower part of the cell, including the expression of BDNF and NT-3 in the lower part of the cell. The first step is to create a better environment for the future. In 2007, the ELF-1 and Sek were combined to form a single cell, and the ELF-1 and COS cells were found to form a single cell. The 3T3 cells were found to form a single cell. The cell line of ELF-1 was found in the cell line. BRL mRNA is extracted, RT-PCR is used to detect and report new regulatory cDNA, and Sek mRNA is used to detect and report new regulatory cDNA. Ret is a late growth process. It is expected that the development process will be analyzed. The activity of the cells increased in the first day, decreased in the second day, and increased again in the second week. In one case, the distal part of the spinal cord was cut off, and 3 days after the cut, the NGF with low affinity increased. The first is the second, the third is the fourth, the fourth is the fourth.