Bacteroides LPSに特有の生物活性を担う構造の探究

探索拟杆菌脂多糖独特生物活性的结构

• 批准号: 05671507
• 负责人: 高田 春比古
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05671507/
• 关键词: Bacteroides intermedius; リポ多糖; 内毒素; 線維芽細胞; マイトジェン; インターロイキン-6; 腫瘍壊死因子; リムラス活性

歯周病の発症・進行に深く係わるBacteroides属の内毒素性リポ多糖(LPS)は、Sslmonel-la等の通常のLPSとは異なる化学構造と生物活性を有する事が示されてきた。特に、Bacte-roidesのLPSが通常のLPSに不応答性のC3H/HeJマウスのリンパ系細胞やヒト歯肉線維芽細胞をも活性する事実は、歯周病の病因論との係わりからも注目されている。しかし、このような活性がLPSのどのような構造に起因するのかについては不明のままである。我々は、Bacteroides intermedius(Prevotella intermedia)ATCC 25611よりフエノール・クロロフオ ルム・石油エーテル混液(PCP)で抽出したLPS-PCPが、これまで頻用されてきた熱フエノール・水抽出のLPS-PWとは異なり、C3H/HeJマウスの脾リンパ球にマイトジェン活性を殆ど及ぼさない事から,LPS-PWには内毒素以外の活性物質が混入しているのではないかと考えた。そこで,LPS-PWのゲル電気泳動(DOC-PAGE)像に認められ,LPS-PCPのそれには認められない高分子量バンド(10-12kDa)を含む画分をフエノール・水抽出物から精製する事を試みた。得られたBM(Bacteroides mitogen)画分は、リムラス活性を殆ど示さないにもかかわらず,C3H/HeJマウスの脾細胞に対するマイトジェン活性、同マウスの腹腔マクロフア ージよりのインターロイキン(IL)-6および腫瘍壊死因子(TNF-alpha)誘導活性ならびに歯肉線維芽細胞よりのIL-6誘導活性をLPS-PWよりも強く発揮した。さらに、BM画分のマイトジェン活性は熱および蛋白分解酵素に耐性で、過沃素酸感受性であり、LPSの作用を阻害するポリミキシンBによって抑制されなかった。なお、これらの実験で、LPS-PWはBM画分と、通常型LPSの性質を示したLPS-PCPとの中間的な活性スペクトルを示した。以上の成績はBacteroidesのLPSが示す特異な生物活性が非内毒素性で非タンパク性の物質に起因する事を示唆するとともに,Bacte-roidesの新奇なビルレンス因子の存在を明かにしたものと言える。

与常规的LP相比，牙周疾病的发作和进展与牙周疾病的发作和进展非常重要，与常规LP（如sslmonel-la）具有不同的化学结构和生物学活性。特别是，Bacte-Roides LPS还激活了对正常LP的C3H/HEJ小鼠的淋巴样细胞和人牙龈成纤维细胞，这一事实引起了与牙周疾病的发病机理有关的关注。但是，目前尚不清楚LPS产生什么结构。我们怀疑用苯酚，叶绿体和货物醚混合物（PCP）提取的LPS-PCP从细胞质中（Prevotella Intermedia Intermedia）ATCC 25611几乎没有有丝分裂的活性，这些活性在脾淋巴细胞上的C3H/HEJ小鼠的脾淋巴细胞几乎没有C3H/HEJ小鼠的频繁使用，与频繁使用的lps lim Mounia Mouse Out lim Mouse Out lip lip lip-pep-pw and-Pw and-Pw and-pw aft lps-pw and pw aft lps-pw and pw aft-pw y Mouse。活性物质以外的内毒素。因此，我们试图纯化含有在LPS-PW的凝胶电泳（DOC-PAGE）图像中发现的高分子重量带（10-12 kDa）的馏分，而不是在LPS-PCP中从苯酚 - 水提取物中的图像。所得的BM（细菌丝原）馏分在C3H/HEJ小鼠的脾细胞上表现出有丝分裂的活性LPS-PW。此外，BM馏分的有丝分裂活性对热和蛋白酶具有抗性，周期性酸敏感，而不是受到抑制LPS作用的多层型BM抑制。在这些实验中，LPS-PW显示了BM馏分和LPS-PCP之间的中间活性谱，该谱显示出正常LPS的性质。上述结果表明，菌孢子虫的LPS所表现出的独特生物学活性是由于非耐毒素和非蛋白质物质引起的，可以说这揭示了菌属中一种新型的毒力因子的存在。

项目成果

高田春比古(分担執筆): "医学微生物学の新しい展開1993" 菜根出版、東京, 587 (1993)

Haruhiko Takada（合著者）：“1993 年医学微生物学的新发展”Nane Publishing，东京，587（1993）

Masato Tamura: "Enhancement of human hepatocyte growth factor production by interleukin-1alpha and-1beta and tumor necrosis factor-alpha by fibroblasts in culture." The Journal of Biological Chemistry. 268. 8140-8145 (1993)

Masato Tamura：“培养的成纤维细胞通过白介素-1α和-1β以及肿瘤坏死因子-α增强人肝细胞生长因子的产生。”

Haruhiko Takada: "Cytokine induction by extracellular products of oral viridans group streptococci." Infection and Immunity. 61. 5252-5260 (1993)

Haruhiko Takada：“口腔草绿色链球菌细胞外产物诱导细胞因子。”

Haruhiko Takada: "Induction of inflammatory cytokines by soluble moiety prepared from an enzayme lysate of Actinomyces viscosus cell walls." The Journal of Medical Microbiology. 38. 395-400 (1993)

Haruhiko Takada：“由粘性放线菌细胞壁的酶裂解物制备的可溶性部分诱导炎症细胞因子。”