小腸及び腎尿細管上皮細胞における薬物輸送体の分子生物学的研究

小肠和肾小管上皮细胞药物转运蛋白的分子生物学研究

• 批准号: 05671814
• 负责人: 乾 賢一
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05671814/
• 关键词: 腸管吸収; 尿細管分泌; 培養上皮細胞; 輸送担体; 有機カチオン; ジペプチド; PCRクローニング; 卵母細胞

小腸のペプチド輸送系(吸収)、尿細管の有機カチオン輸送系(分泌)を中心に、これら輸送体の構造と機能について以下の検討を行った。1.培養腸上皮細胞Caco-2におけるジペプチド輸送系の発現と輸送特性:抗悪性腫瘍剤ベスタチン並びに経口用セファロスポリン系抗生物質の輸送を指標として、Caco-2細胞に発現しているジペプチド輸送体の細胞膜局在性及び輸送機構について比較検討した。Caco-2細胞の頂側膜にはH^+/ジペプチド共輸送体が局在し、ジペプチド類似薬物の細胞内取込みを媒介していること、一方側底膜にはH^+勾配非依存性ジペプチド輸送体が発現しており、これらジペプチド類の側底膜透過を促進していることが示唆された。2.培養腎上皮細胞LLC-PK_1における有機カチオン輸送系の発現と輸送調節:LLC-PK_1細胞の頂側膜並びに側底膜には有機カチオン輸送体が発現しており、尿細管分泌に対応するカチオン性薬物輸送を媒介している。両細胞膜の有機カチオン輸送体の活性調節についてpH感受性を中心に検討を加えた結果、LLC-PK_1細胞の頂側膜に局在するH^+/有機カチオン逆輸送体は、pH勾配によって輸送の方向性と活性が調節されていること、一方側底膜有機カチオン輸送体は、細胞内外の環境pHによって制御されていることが示唆された。3.LLC-PK_1細胞におけるアミン輸送系ファミリーの発現と部分PCRクローニング:尿細管に発現しているカチオン輸送体の検索を目的として、内因性カチオンのコリン輸送体が属するアミン輸送系ファミリーの保存アミノ酸配列を基にプライマーを合成し、LLC-PK_1細胞のmRNAを用いてRT-PCRを行った。約700bpのPCR産物をサブクローニングした後、得られたクローンの部分塩基配列を調べたところ、ラット脳・脊髄コリン輸送体と高いホモロジーを有することがわかった。

Small intestine transport system (absorption), urine tubule organic transport system (secretion), the structure and function of the transport body are discussed below. 1. Development and transport characteristics of Caco-2 cell membrane transport system in culture: anti-inflammatory agent and anti-inflammatory agent transport index of Caco-2 cell membrane transport system. The apical membrane of Caco-2 cells is a medium for the intracellular transport of H^+/pH-like compounds, and the lateral basal membrane of Caco-2 cells is a medium for the H^+-ligand independent transport of pH-like compounds, which promotes the transmission of pH-like compounds through the lateral basal membrane. 2. The development and regulation of organic transport system in cultured renal epithelial cells LLC-PK_1: The development of organic transport system in apical and basal membranes of LLC-PK_1 cells, and the regulation of organic transport system in urinary tubule secretion. The results of pH sensitivity central analysis of cell membrane organic transporter activity regulation, H +/organic transporter activity regulation of apical membrane of LLC-PK_1 cells, pH sensitivity regulation of transport direction, organic transporter activity regulation of lateral membrane of LLC-PK_1 cells, pH control of environment in and out of cells are shown. 3. PCR analysis of LLC-PK_1 cell gene expression system: mRNA expression in urine tubule, mRNA expression in LLC-PK_1 cell, mRNA expression in LLC-PK_1 cell. About 700bp PCR product was obtained after the partial base alignment of the PCR product was adjusted.

项目成果

H.Saito: "Dipeptide transporters in apical and basolateral membranes of the human intestinal cell line Caco-2" Am.J.Physiol.265. G289-G294 (1993)

H.Saito：“人肠细胞系 Caco-2 顶膜和基底外侧膜中的二肽转运蛋白”Am.J.Physiol.265。

乾 賢一: "膜学実験シリーズ 第I 巻 生体膜編 日本膜学会編" 共立出版, 424 (1994)

Kenichi Inui：“膜科学实验系列第一卷，生物膜版，日本膜学会编辑”Kyoritsu Shuppan，424（1994）

K.Ohoka: "p-Aminohippurate transport in rat renal brush-border membranes:a potential-sensitive transport system and an anion exchanger." Biol.Pharm.Ball.16. 395-401 (1993)

K.Ohoka：“大鼠肾刷状缘膜中的对氨基马尿酸转运：电位敏感转运系统和阴离子交换器。”

S.Maeda: "Transport of organic cation in renal brush-border membrane from rats with renal ischemic injury" Biochim.Biophys.Acta. 1150. 103-110 (1993)

S.Maeda：“肾缺血损伤大鼠肾刷状缘膜中有机阳离子的转运”Biochim.Biophys.Acta。

H.Saito: "Expression of human intestinal dipeptide transporter in Xenopus laevis oocytes" Biochem.Pharmacol.45. 776-779 (1993)

H.Saito：“非洲爪蟾卵母细胞中人肠二肽转运蛋白的表达”Biochem.Pharmacol.45。