新規に発見したラット補体制御膜因子のアンチセンスヌクレオチドを用いた病態解析

新发现的大鼠补体调节膜因子反义核苷酸的病理学分析

• 批准号: 06454195
• 负责人: 岡田 秀親
• 金额: --
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06454195/

ラット補体制御膜因子として5I2Agを精製するとともに、そのcDNAもクローニングしたので、5I2Agの生体内での役割を明確にし、それの異常が種々の病態を引き起こすことを明らかにするための検討を行った。(1)ラットヘパトーマ由来の腫瘍細胞に5I2AgcDNAのアンチセンスDNAをトランスフェクトすると、5I2Agの発現を抑制できることを確かめた。発現動態の解析は5I2Agに対するモノクローナル抗体(mAb)である5I2を用いて蛍光染色し、FACScanで解析した。(2)生体内での5I2Agの発現をアンチセンスcDNAでin vivoで抑制するための基礎が充分確立するに至らなかったので、5I2Agに対するmAbを投与して5I2Agの機能をブロックする方法で検討を行った。5I2Agに対するmAbである5I2のF(ab′)_2を作成し、これをウイスターラットの静脈内に1mg/kgに投与した。投与に先立ち、動脈内に挿入しおいた血圧計を用いて血圧の継時変化を記録した。5I2投与直後の2分前で軽度の血圧上昇を来した後、血圧低下が起こり、回復には40分以上要した。コブラ毒因子(CVF)を前日に投与して、血中の補体価を下げておくと、5I2投与によるこのような変化は認められなかったので、補体反応が介在した血圧低下反応であることがわかった。anti-C3を用いて、補体C3の組織等への沈着をしらべてみると5I2投与5分後には全身の血管内皮細胞にC3の沈着が認められたが、30分後にはC3の染色は弱くなっていた。補体反応が起こるとC3aやC5aなどのanaphylatoxinsが形成されるので、これらのanaphylatoxinを不活化する作用を持つCarboxypeptidaseも生体内の反応の制御に働いていると予測した。そこでCarboxypeptidase inhibitorを投与しておいてみると5I2投与による血圧低下が遷延し、多くのラットはそのまま死亡した。従って、生体内では炎症反応を抑制するカルボキシペプチターゼの役割も大きいことがわかった。

The gene expression of 5I2Ag was detected by PCR. The gene expression of 5I2Ag was detected by PCR. (1)The expression of 5I2Ag DNA in tumor cells from which the tumor originated was inhibited. The analysis of 5I2Ag was performed by fluorescent staining and FACScan. (2)The basis for the expression of 5I2Ag in vivo was fully established, and the mAb against 5I2Ag was administered. 5I2-F(ab′)_2 was prepared and administered intravenously at a dose of 1mg/kg. The blood pressure meter is used to record the blood pressure change in the heart. 5I2 shots and 2 minutes before the blood pressure rise, blood pressure drop, recovery, more than 40 points Cv factor (CVF) is present in the blood, complement is present in the blood. Anti-C3 and complement C3 were used to inhibit the expression of C3 in vascular endothelial cells. After 5 minutes, anti-C3 and complement C3 were expressed in vascular endothelial cells. After 30 minutes, anti-C3 staining was weak. Complement reaction begins with the formation of C3a and C5a anaphylatoxins, and the activation of anaphylatoxins continues with the detection of Carboxypeptidase in the control of complement in vivo. Carboxypeptidase inhibitor is used to inhibit blood pressure and death. In vivo, inflammation is inhibited.

项目成果

Branyi,L.,Okada,H.et al: "Cell surface bound complement regulatory activity is necessary for the in vivo survibal of KDH-8 rat hepatoma." Immunolgy. 82. 522-528 (1994)

Branyi,L.,Okada,H.等人：“细胞表面结合的补体调节活性对于 KDH-8 大鼠肝癌的体内生存是必需的。”

Matsuo,S.,Okada,H.et al: "In vitro effects of monoclonal antibodies which functionally inhibit complement regulatory proteins in rats." J.Exp.Med.180. 1619-1627 (1994)

Matsuo,S.,Okada,H.等人：“功能性抑制大鼠补体调节蛋白的单克隆抗体的体外效应。”

Takahashi,M.,Okada,H.et al: "The substantia nigra is a major target for neurovirulent infruenza A virus." J.Exp.Med.(in press). (1995)

Takahashi,M.,Okada,H.等人：“黑质是神经毒性甲型流感病毒的主要目标。”

Baranyi,K.,Okada,H.et al: "A law molecular weight phagocytosis-inhibitory factor obtained from human erythrocyte membranes specifically downregulates Mac-1 activity...." J.Immunol.153. 1724-1735 (1994)

Baranyi,K.,Okada,H.等人：“从人红细胞膜中获得的一种规律分子量吞噬抑制因子特异性下调 Mac-1 活性......”J.Immunol.153。

Okada,N.,Okada,H.et al: "A monoclonal antibody which blocks the complement regulatory activity of guinea pig erythrocytes and characterization of its antigen as guinea pig decay acceleratin factor." J.Immunol.(in press). (1995)

Okada,N.,Okada,H.等人：“一种单克隆抗体，可阻断豚鼠红细胞的补体调节活性，并将其抗原表征为豚鼠腐烂加速因子。”