基底膜に会合するIV型コラーゲン分子とそれをコードする遺伝子発現の特性

与基底膜相关的IV型胶原分子的特征及其编码基因的表达

• 批准号: 06454250
• 负责人: 二宮 善文
• 金额: $ 4.86万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06454250/
• 关键词: 基底膜; IV型コラーゲン; 遺伝子発現; 細胞外マトリックス; プロモーター

本年度施行した研究によって、当初掲げた研究目的の大半を達成することができた.1)ヒトα4(IV)鎖のアミノ酸一次構造を決定することができた.α4(IV)鎖をコードするcDNAの重複クローンを単離し、ヒトα4(IV)鎖のアミノ酸一次構造を決定することができた.2)α6(IV)鎖をコードする遺伝子の上流域の構造決定とα5(IV)遺伝子との関係を明かにした.ヒトα6(IV)鎖のアミノ酸一次構造を決定し報告した.さらにこれらのcDNAをもとに遺伝子DNAの構造を決定しつつある.私どもはα6(IV)鎖をコードする遺伝子の上流域にα5(IV)鎖をコードする遺伝子が存在しており、しかもこれらの遺伝子が反対向きに並んでいることをつきとめた.さらに興味あることは、α6(IV)鎖をコードする遺伝子の発現は通常の遺伝子発現と異なって、二つのRNA転写産物が存在することがわかった.このことはおそらくは二つのプロモーターが存在しこれらが組織特異的な発現に関係しているであろうことが想像される.3)α(IV)鎖特異的抗体の作製を行いIV型コラーゲン6遺伝子の発現様式を明かにした.上述のα4(IV)鎖およびα6(IV)鎖の一次構造より推定される特異抗体を作製に適する部位を同定し合成ペプチドを作製、このペプチドに対するモノクローン抗体を作製した.抗体は各々特異的であり、ウェスタンブロット、各組織の免疫染色法でこれらの特異的なα(IV)鎖の存在部位を特定することができた.その結果α1(IV)およびα2(IV)鎖はすべての基底膜に存在すること、α3(IV)およびα4(IV)鎖は限定された部位にしか発現されないが常にこの二つの遺伝子は同時に発現することがわかった.さらにα5(IV)およびα6(IV)鎖は限定された部位に必ずしも同時には発現しないことがわかった.この部位特異的発現が上述の二プロモーターの存在と関連があることが想像される.

This year's implementation of the study was carried out in the first half of the year, and most of the research objectives were achieved.α4(IV)-lock cDNA repeat sequences are isolated from α 4(IV)-lock cDNA repeat sequences, and α4(IV)-lock cDNA repeat sequences determine the primary structure of α 4(IV)-lock cDNA repeat sequences. α6(IV)-lock cDNA repeat sequences determine the upstream structure of α5(IV)-lock cDNA repeat sequences. The primary structure of α6(IV) chain is determined. The structure of DNA is determined by the cDNA sequence. The alpha 6(IV) lock is located in the upper part of the channel. The alpha 5(IV) lock is located in the upper part of the channel. The channel exists in the opposite direction. In addition, α6(IV) locks are found in the presence of RNA. Usually, RNA is found in the presence of RNA. The development of a tissue-specific antibody is described in detail below. 3) Production of an α(IV)-specific antibody. The primary structure of the α4(IV) lock and α6(IV) lock is estimated to be the same as that of the specific antibody. Antibodies are specific to each tissue, and immunostaining methods are used to determine the presence of specific α(IV) locks. The results show that α1(IV) and α2(IV) locks are present in the basement membrane of the substrate, α3(IV) and α4(IV) locks are present in the restricted position, and the two locks are present simultaneously. The α5(IV) and α6(IV) locks must be closed at the same time as the α 5(IV) locks. The site-specific occurrence of this phenomenon is related to the existence of the above mentioned two kinds of phenomena.

项目成果

Yoshioka H.,Greenwel P.,Ninomiya Y.,et al: "Structural and functional analysis of the promoter of the human α1(X1) collagen gene." J.Biol.Chem.270. 418-424 (1995)

Yoshioka H.、Greenwel P.、Ninomiya Y. 等人：“人类 α1(X1) 胶原基因启动子的结构和功能分析。J.Biol.Chem.270 (1995)。”

Sugimoto M.,Oohashi T.,and Ninomiya Y.: "The two genes,COL4A5 and COL4A6,coding for the two new basement membrane collagen chains,α5(IV) and α6(IV),are located head-to-head in close proximity on chromosome Xq22" Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.91. 11679-11683 (1

Sugimoto M.、Oohashi T. 和 Ninomiya Y.：“编码两个新基底膜胶原链 α5(IV) 和 α6(IV) 的两个基因 COL4A5 和 COL4A6 头对头位于染色体 Xq22 上的紧密接近”Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.91. 11679-11683 (1

Inoguchi K.,Yoshioka H.,Khaled uzzaman M.,and Ninomiya Y.: "The mRNA for the α1(XIX) collagen chain,a new member of FACITs,contain a long unusual 3' untranslated region and displays many unique splicing variants." J.Biochem.(Tokyo). 117. 137-146 (1995)

Inoguchi K.、Yoshioka H.、Khaled uzzaman M. 和 Ninomiya Y.：“FACIT 的新成员 α1(XIX) 胶原链的 mRNA 包含一个长的不寻常的 3 非翻译区，并显示出许多独特的剪接变体” J.Biochem.（东京）。117. 137-146 (1995)

Li Y.,Lacerda D.A.,Warman M.L.,Ninomiya Y.,et al: "A fibrillar collagen gene,Colllal,is essential for skeletal morphogenesis." Cell. 80. 423-430 (1995)

Li Y.、Lacerda D.A.、Warman M.L.、Ninomiya Y. 等人：“纤维状胶原蛋白基因 Collllal 对于骨骼形态发生至关重要。”

Oohashi T.,Sugimoto M.,Mattei M.-G.,and Ninomiya Y.: "Identification of a new collagen IV chain,α6(IV),by cDNA isolation and assignment of the gene to chromosome Xq22,which is the same locus for COL4A5." J Biol Chem. 269. 7520-7526 (1994)

Oohashi T.、Sugimoto M.、Mattei M.-G. 和 Ninomiya Y.：“通过 cDNA 分离和将基因分配到染色体 Xq22 来鉴定新的胶原蛋白 IV 链 α6(IV)，这与染色体 Xq22 相同COL4A5 的位点。”《生物化学杂志》269. 7520-7526 (1994)