分化方向性の制御から挑む再生医工学

再生医学工程通过控制分化方向面临挑战

• 批准号: 14657031
• 负责人: 山本 雅之
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657031/
• 关键词: 自己複製能維持; 胎児造血幹細胞; 転写制御; 細胞分化方向性; OP9ストローマ細胞; マイクロアレイ法; c-Kit陽性骨髄造血前駆細胞

分化方向性の制御を維持するモデルとして,造血幹細胞を選び,以下の解析を行った.(1)造血幹細胞の自己複製能維持に必要な転写因子を同定することを目指し,幹細胞の維持に重要と考えられる転写因子GATA-2の発現制御機構を解析した.GATA-2遺伝子の発現をGFPレポータータンパク質で解析できるトランスジェニックマウスを作製し,9.5日胚のpara-aortic splan chnopleura,同13.5日胚の胎児肝でのGATA-2遺伝子の発現を解析した.その結果,GATA-2遺伝子の転写制御に必須なシスエレメントを含む領域を同定することに成功した.現在,さらに結合領域を絞り込むために,同トランスジェニック法とin vivo footprint法による解析を行っている.今後は,その結合配列に対するトランス因子を同定するために,One-Hybrid法を行うことを予定しており,フローサイトメトリーにて分取したGFP陽性細胞からcDNAライブラリーを作成中である.(2)造血幹細胞の性質を有した細胞株を作成することは,幹細胞自体の稀少性の点から,今後の解析にたいへん有用である.そこで温度感受性T抗原を,胎児造血幹細胞に発現しているトランスジェニックマウスの作製に取り組み,成功した.今後,同トランスジェニックマウスから得られる血液幹細胞を用いて,血液細胞系の分化に重要な転写因子群の発現プロファイルを網羅的に解析し,分化の方向に働く転写因子群とその拮抗因子群を同定する予定である.同定後,分化に拮抗する因子群を,レトロウイルス系を用いて,分化抑制状態にある各種培養細胞や,分化抗原を発現する骨髄細胞に導入し,分化/脱分化の制御を試みる.

The direction of differentiation controls the maintenance of hematopoietic cells, hematopoietic cells are selected, and the following is analyzed. (1) Hematopoietic progenitor cells can replicate themselves and maintain the necessary factors. It is very important for the maintenance of the cell to determine the writing factor of the GATA-2 system. The GATA-2 computer system shows that there is a significant difference between the GFP and the fetal liver. in the Gata-2 system, the GATA-2 system shows that there is no significant difference between the two groups. The GATA-2 computer system shows that there is a significant difference between the two parts of the body. The results show that the GATA-2 subsystem must verify that the domain is the same as that of the system. At present, in combination with the field information system, the same as the in vivo footprint method, the analysis method is effective. In the future, in combination with the sequence of genetic factors, the One-Hybrid method was used to determine the number of genes, and the One-Hybrid method was used to determine the size of the cells, and the cells were separated into GFP cells. (2) the hematopoietic cells were divided into two groups. (2) the hematopoietic cells were divided into two groups. (2) the hematopoietic cells were divided into two groups. In the future, you will be able to analyze the useful information. The temperature sensitive T antigen was detected in the fetal hematopoietic cells. The fetal hematopoietic cells were successful. In the future, the blood cell differentiation is important in the analysis of the network, and the direction of differentiation is the same as that of the antagonistic factor group. After the same determination, the differentiation antagonistic factor group was used, the differentiation inhibition was used to culture all kinds of cells, and the differentiation antigen was detected. The differentiation

项目成果

Kirito, K., Yamamoto, M., et al.: "A functional role of Stat3 in in vivo megakaryopoiesis"Blood. 99巻. 3220-3227 (2002)

Kirito, K., Yamamoto, M., et al.：“Stat3 在体内巨核细胞生成中的功能作用”Blood. 99. 3220-3227 (2002)

Nishikawa, K.: "Self-association of Gata1 enhances transcriptional activity in vivo in zebra fish embryos"Mol.Cell.Biol.. 23. 8295-8305 (2003)

Nishikawa, K.：“Gata1 的自关联增强了斑马鱼胚胎体内的转录活性”Mol.Cell.Biol.. 23. 8295-8305 (2003)

Suzuki, N.: "Identification and characterization of 2 types of erythroid progenitors that express GATA-1 at distinct levels."Blood. 102. 3575-3583 (2003)

Suzuki, N.：“以不同水平表达 GATA-1 的 2 种红系祖细胞的鉴定和表征。”血液。

Shimizu, R.: "Transgenic rescue of GATA-1-deficient mice with GATA-1 lacking a FOG-1 association site phenocopies patients with X-linked thrombocytopenia."Blood. (in press). (2004)

Shimizu, R.：“用缺乏 FOG-1 关联位点的 GATA-1 来转基因拯救 GATA-1 缺陷型小鼠，可复制 X 连锁血小板减少症患者的表型。”血液。

Imagawa, S.: "A GATA-specific inhibitor (K-7174) rescues anemia induced by IL-1bata, TNF-alpha, or L-NMMA."FASEB J.. 17. 1742-1744 (2003)

Imakawa, S.：“GATA 特异性抑制剂 (K-7174) 可挽救由 IL-1bata、TNF-α 或 L-NMMA 引起的贫血。”FASEB J.. 17. 1742-1744 (2003)