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新たに発見された活性型L1レトロトランスポゾンの実験病理学への応用

新发现的激活L1逆转录转座子在实验病理学中的应用

基本信息

批准号：
14657055
负责人：
樋口京一
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657055/
关键词：
レトロトランスポゾンラット L1 突然変異 Chediak-Higashi症候群 Lyst ベージュラット

项目摘要

ラットのlysosomal trafficking regulator(Lyst)遺伝子内に存在するL1bレトロトランスポゾンに関して以下の知見を得た。1.L1bを哺乳動物発現ベクターpCEP4中にクローニングし、培養HeLa細胞にトランスフェクトして、転移の生じたG418耐性コロニーを多数得た。L1bの転移挿入先の遺伝子の3'RACE法による同定を試みた。しかしながら、全クローンコロニーにおいてL1b内の同一部位を利用したpoly A化が生じており、遺伝子の同定には至らなかった。そこでL1bとG418耐性マーカー遺伝子との間にスプライスドナーを挿入した新たな発現コンストラクトを作製し、同様の検討を行なっている。2.無細胞蛋白合成系によるL1bのORF1およびORF2産物の大量調製を試みた。ベクターとしてpET-21aを使用したが、蛋白質合成は認められなかった。そこで無細胞蛋白合成系により適したpIVEX2.3ベクターを使用したコンストラクトを作製し、同様の検討を行なっている。3.serial analysis of gene expression(SAGE)法を用いて3ヶ月齢のBDF1系マウス精巣でのL1配列の発現パターンを調査した。また、老化して精巣での染色体DNAのメチル化などに乱れが生じた場合にともないL1の転写活性が変化する可能性を調査するために、29ヶ月齢のBDF1系マウス、および促進老化のモデルである14ヶ月齢のSAMP1系マウスを用いて、同様に調査を行なった。その結果、いずれの系統、月齢においてもL1配列の発現は極めて低いことが明らかとなった。L1bのマウス精巣における高発現を誘起するために、精巣特異的プロモーターであるヒストンH1t遺伝子のプロモーターの下流にL1bを連結した発現コンストラクトを作製中である。

ラットのlysosomal trafficking regulator (Lyst) 缝子内にexisting するL1bレトロトランスポゾンに关して下の知见を得た. 1.L1b mammal 発appears in pCEP4, cultured HeL a cell にトランスフェクトして, 転动の生じたG418 resistant コロニーをmostly obtained. L1b の転 transferred into the first の缝子の3'RACE method with the same determination を trial みた.しかしながら、全クローンコロニーにおいてL1b The same part is used したpoly Ahua が生じており, 伝子の同定には to らなかった.そこでL1bとG418 resistance マーカー伝子との间にスプライスドナーをInsert the new たな発行なっている. 2. A large-scale preparation test of the cell-free protein synthesis system によるL1bのORF1 and およびORF2 products.ベクターとしてpET-21aを uses したが, protein synthesis はcognition められなかった.そこで Cell-free protein synthesis system により Adaptable pIVEX2.3 ベクターをUsing したコンストラクトをし、同様の検検を行なっている. 3. The serial analysis of gene expression (SAGE) method was used to investigate the BDF1 series of the BDF1 series using the SAGE method.また、agingして精巣でのchromosomalDNAのメチル化などに乱れが生じOccasionally, L1's activeness, change, possibility, investigation, etc. , 29ヶ月颢のBDF1 series MASHI, およびpromotes aging のモデルである14 ヶ月齢のSAMP1 Department of Masayoshi and いて, same as 様にinvestigation を行なった.そのRESULT, いずれのSYSTEM, 月齢においてもL1 arrangement の発成は极めてlow いことが明らかとなった. L1bのマウス精巣における高発 appear をinducing するために, 精巣specific プロモーターであるヒストンH1t伝子のプロモーターのdegradable にL1bをconnection した発开コンストラクトを中做である.

项目成果

期刊论文数量（18）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Kitagawa K, Wang J, Matsushita T, Kogishi K, Hosokawa M, Fu X, Guo Z, Mori M, Higuchi K: "Polymorphisms of mouse apolipoprotein A-II : seven alleles found among 41 inbred strains of mice."Amyloid. 10(4). 207-214 (2004)

Kitakawa K、Wang J、Matsushita T、Kogishi K、Hosokawa M、Fu X、Guo Z、Mori M、Higuchi K：“小鼠载脂蛋白 A-II 的多态性：在 41 个近交系小鼠中发现的 7 个等位基因。”淀粉样蛋白。

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Xing Y, Higuchi K: "Amyloid Fibril Proteins"Mech. Ageing Dev.. 123. 1625-1636 (2002)

Xing Y，Higuchi K：“淀粉样纤维蛋白”Mech。

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Xing Y, Nakamura A, Korenaga T, Guo Z, Yao J, Fu X, Matsushita T, Kogishi K, Hosokawa M, Kametani F, Mori M, Higuchi K: "Induction of protein conformational change in mouse senile amyloidosis"J. Biol. Chem.. 277. 33164-33169 (2002)

Xing Y，Nakamura A，Korenaga T，Guo Z，Yao J，Fu X，Matsushita T，Kogishi K，Hosokawa M，Kametani F，Mori M，Higuchi K：“小鼠老年淀粉样变性中蛋白质构象变化的诱导”J。

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

樋口京一, 森政之: "分子生物学・免疫学キーワード辞典(第2版)(永田和宏、宮坂昌之、宮坂信之、山本一彦編集)"医学書院(東京). 1036 (2003)

Kyoichi Higuchi、Masayuki Mori：“分子生物学/免疫学关键词词典（第 2 版）（由 Kazuhiro Nagata、Masayuki Miyasaka、Nobuyuki Miyasaka、Kazuhiko Yamamoto 编辑）”Igaku Shoin（东京）1036（东京）。