新たに発見された活性型L1レトロトランスポゾンの実験病理学への応用

新发现的激活L1逆转录转座子在实验病理学中的应用

• 批准号: 14657055
• 负责人: 樋口 京一
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657055/
• 关键词: レトロトランスポゾン; ラット; L1; 突然変異; Chediak-Higashi症候群; Lyst; ベージュラット

ラットのlysosomal trafficking regulator(Lyst)遺伝子内に存在するL1bレトロトランスポゾンに関して以下の知見を得た。1.L1bを哺乳動物発現ベクターpCEP4中にクローニングし、培養HeLa細胞にトランスフェクトして、転移の生じたG418耐性コロニーを多数得た。L1bの転移挿入先の遺伝子の3'RACE法による同定を試みた。しかしながら、全クローンコロニーにおいてL1b内の同一部位を利用したpoly A化が生じており、遺伝子の同定には至らなかった。そこでL1bとG418耐性マーカー遺伝子との間にスプライスドナーを挿入した新たな発現コンストラクトを作製し、同様の検討を行なっている。2.無細胞蛋白合成系によるL1bのORF1およびORF2産物の大量調製を試みた。ベクターとしてpET-21aを使用したが、蛋白質合成は認められなかった。そこで無細胞蛋白合成系により適したpIVEX2.3ベクターを使用したコンストラクトを作製し、同様の検討を行なっている。3.serial analysis of gene expression(SAGE)法を用いて3ヶ月齢のBDF1系マウス精巣でのL1配列の発現パターンを調査した。また、老化して精巣での染色体DNAのメチル化などに乱れが生じた場合にともないL1の転写活性が変化する可能性を調査するために、29ヶ月齢のBDF1系マウス、および促進老化のモデルである14ヶ月齢のSAMP1系マウスを用いて、同様に調査を行なった。その結果、いずれの系統、月齢においてもL1配列の発現は極めて低いことが明らかとなった。L1bのマウス精巣における高発現を誘起するために、精巣特異的プロモーターであるヒストンH1t遺伝子のプロモーターの下流にL1bを連結した発現コンストラクトを作製中である。

ラ ッ ト の lysosomal trafficking regulator (Lyst) posthumous son 伝 に exist within す る L1b レ ト ロ ト ラ ン ス ポ ゾ ン に masato し て の know of these を た. 1 L1b を mammals 発 now ベ ク タ ー pCEP4 in に ク ロ ー ニ ン グ し, cultivating HeLa に ト ラ ン ス フ ェ ク ト し て, planning move の じ た G418 patience コ ロ ニ ー を た most. L1b <s:1> 転 transfer the 伝 into the 伝 child of the previous <s:1> 3’race method による the same を test みた. し か し な が ら, whole ク ロ ー ン コ ロ ニ ー に お い て in L1b を use same part の し た poly real born A change が じ て お り, but 伝 の with fixed に は to ら な か っ た. そ こ で L1b と G418 patience マ ー カ ー posthumous son 伝 と の between に ス プ ラ イ ス ド ナ ー を scions into し た new た な 発 now コ ン ス ト ラ ク ト し, with others in the を cropping の 検 line for を な っ て い る. 2. Cell-free protein synthesis line によるL1b <s:1> ORF1およびORF2 product <e:1> large-scale modulation を test みた. Youdaoplaceholder0, タ, タ, と, て. pET-21aを uses たが たが, protein synthesis められな, められな, った, った. そ こ で cell free protein GeChengXi に よ り optimum し た pIVEX2.3 ベ ク タ ー を use し た コ ン ス ト ラ ク ト し, with others in the を cropping の 検 line for を な っ て い る. 3. The serial analysis of gene expression (SAGE) method を with い て ヶ 3 months 齢 の BDF1 department マ ウ ス fine 巣 で の L1 with column の 発 now パ タ ー ン を survey し た. ま た, aging し て fine 巣 で の chromosome DNA の メ チ ル change な ど に disorderly れ が raw じ た occasions に と も な い L1 の が planning write activity - the す る possibility を survey す る た め に, 29 ヶ month 齢 の BDF1 department マ ウ ス, お よ び promote aging の モ デ ル で あ る ヶ 14 months 齢 の SAMP1 department マ ウ ス を with い て, with others in に survey line を な っ Youdaoplaceholder0. The そ <s:1> result, the ずれ ずれ <e:1> system, and the monthly 齢にお て て <s:1> L1 allocation <s:1> show an <s:1> extremely めて low <s:1> とが とが brightness ら となった となった となった. L1b の マ ウ ス fine 巣 に お け る high 発 now を induced す る た め に, precise 巣 peculiar プ ロ モ ー タ ー で あ る ヒ ス ト ン H1t posthumous son 伝 の プ ロ モ ー タ ー の obscene に L1b を link し た 発 now コ ン ス ト ラ ク ト を cropping systems in で あ る.

项目成果

Kitagawa K, Wang J, Matsushita T, Kogishi K, Hosokawa M, Fu X, Guo Z, Mori M, Higuchi K: "Polymorphisms of mouse apolipoprotein A-II : seven alleles found among 41 inbred strains of mice."Amyloid. 10(4). 207-214 (2004)

Kitakawa K、Wang J、Matsushita T、Kogishi K、Hosokawa M、Fu X、Guo Z、Mori M、Higuchi K：“小鼠载脂蛋白 A-II 的多态性：在 41 个近交系小鼠中发现的 7 个等位基因。”淀粉样蛋白。

Xing Y, Higuchi K: "Amyloid Fibril Proteins"Mech. Ageing Dev.. 123. 1625-1636 (2002)

Xing Y，Higuchi K：“淀粉样纤维蛋白”Mech。

Xing Y, Nakamura A, Korenaga T, Guo Z, Yao J, Fu X, Matsushita T, Kogishi K, Hosokawa M, Kametani F, Mori M, Higuchi K: "Induction of protein conformational change in mouse senile amyloidosis"J. Biol. Chem.. 277. 33164-33169 (2002)

Xing Y，Nakamura A，Korenaga T，Guo Z，Yao J，Fu X，Matsushita T，Kogishi K，Hosokawa M，Kametani F，Mori M，Higuchi K：“小鼠老年淀粉样变性中蛋白质构象变化的诱导”J。

樋口京一, 森 政之: "分子生物学・免疫学キーワード辞典(第2版)(永田和宏、宮坂昌之、 宮坂信之、山本一彦 編集)"医学書院(東京). 1036 (2003)

Kyoichi Higuchi、Masayuki Mori：“分子生物学/免疫学关键词词典（第 2 版）（由 Kazuhiro Nagata、Masayuki Miyasaka、Nobuyuki Miyasaka、Kazuhiko Yamamoto 编辑）”Igaku Shoin（东京）1036（东京）。

Ohta A, Akiguchi I, Seriu N, Ohnishi K, Yagi H, Higuchi K, Hosokawa M.: "Deterioration in learning and memory of inferential tasks for evaluation of transitivity and symmetry in aged SAMP8 mice"Hippocampus. 12. 803-810 (2002)

Ohta A、Akiguchi I、Seriu N、Ohnishi K、Yagi H、Higuchi K、Hosokawa M.：“用于评估老年 SAMP8 小鼠传递性和对称性的推理任务的学习和记忆退化”海马。