权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

マウス個体老化の分子的把握:老化臓器の遺伝子発現レパートリィの作成

对小鼠衰老的分子理解：创建衰老器官的基因表达库

基本信息

批准号：
11877021
负责人：
樋口京一
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

高齢マウスとしては最も広く研究に用いられている系統の一つであるBDF1マウスの雄3ヶ月齢および31ヶ月齢と促進老化のモデルマウスであるSAMP1の雄14ヶ月齢マウスを屠殺し精巣のRNAを分離した。老化の分子的把握を目指すため、精巣での遺伝子発現の差異の網羅的比較をSerial Analysis of Gene Expression (SAGE)法とSuppression Subtractive Hybridization (SSH)法で試みた。より効率良い解析を目指して14塩基のsingle tagを利用する改変SAGEライブラリーを3種の精巣mRNAから作製した。無作為的に数十クローンのプラスミドの塩基配列を読み、ほぼ予測通りのTagの挿入を確認した。今後、各ライブラリーについて約1000クローン(=25,000 Tags)の塩基配列を読み、3つのライブラリーのデータを比較して老化に伴う精巣での遺伝子発現レパートリーの変化の分子的把握を目指す。またSAMP1およびSAMR1マウスの精巣mRNAより二本鎖cDNAを合成した後、PCR-Select^<TM>cDNA Subtraction Kit (CLONTECH)をもちいてSAMP1-SAMR1およびSAMR1-SAMP1の二種類のサブトラクションライブラリーを作製した。ディファレンシャルスクリーニングによりボジティブクローンを選択し、さらにノザンブロットにより発現の差異を調べた。既知遺伝子3種類と未知遺伝子2種類に発現の違いが見られた。SAMR1において発現が高かったGsg1およびACTは成熟精子細胞において発現していると報告されている遺伝子であり、未知遺伝子の一つ(Tall)も3週齢以降に発現して来る。これら3つの遺伝子の発現は11ヶ月齢のSAMP1でさらに減少しており精巣の加齢との関連が示された。

The most important thing to do is to isolate the RNA from the genome. Comparison of the differences in gene expression between aging molecules by Serial Analysis of Gene Expression (SAGE) and Suppression Subtractive Hybridization (SSH) The expression of SAGE mRNA was analyzed by using the single tag of SAGE gene No action, no selection, no base allocation, no pre-test, no entry confirmation. In the future, the basic arrangement of each class will be about 1000 kD (=25,000 Tags), and the molecular control of the generation and transformation of the three classes will be pointed out. After SAMP1 and SAMR1 were synthesized, PCR-Select cDNA <TM>Subtraction Kit (CLONTECH) was used to control SAMP1-SAMR1 and SAMR1-SAMP1. The difference between the two is that the number of people who are interested in the game is different from that of the game. 3 types of known and 2 types of unknown genes are discovered and found in violation. SAMR1 is detected at a high level of Gsg1 and ACT, and mature sperm cells are detected at a high level of Gsg 1 and ACT. The occurrence of this 3-D gene is reduced by SAMP1 in November, and the relationship between the 3-D gene and SAMP1 is shown.