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発生工学的手法を用いた白血病関連転写因子TELの機能解析

利用发育工程方法分析白血病相关转录因子TEL的功能

基本信息

批准号：
14657248
负责人：
三谷絹子
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Dokkyo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

1.TELトランスジェニックマウスの作製:野生型TEL及びそのドミナント・ネガティブHLH (helix-loop-helix)欠失変異体ΔHLHをGATA-1プロモーター下に発現するトランスジェニックマウスをそれぞれ3ラインずつ作製した。しかしながら、ウエスタン解析、免疫沈降法RT-PCR法により発現が確認されなかったため、別のラインを作製した。今後F1個体について、血算、骨髄の形態観察、各種サイトカインを用いた液体培養系での分化誘導実験、コロニー形成実験を行う予定である。さらに、マイクロアレイ解析により標的遺伝子を探索する。2.TELノックアウトマウスの作製:マウスTEL遺伝子の第6エクソン〜第8エクソンの一部をneomycin耐性遺伝子およびIRES-GFP遺伝子で置き換えたターゲッティングベクターを構築し、相同組み換え体ESを1ライン得た。ヘテロマウスを用いてGFPを指標に胎生期のTELの発現部位を明らかにするとともに、ノックアウトマウスを用いて胎生致死のレスキュー実験を行う。3.TELコンディショナルマウスの作製:マウスTEL遺伝子の第7エクソンの両端とそれに続くneomycin耐性遺伝子の端にLox-P配列を挿入したターゲッティングベクターを作製中である。これをES細胞に遺伝子導入し相同組み換え体を得る方針である。さらに、この相同組み換え体にpMC1-Creベクターを導入し、Lox-P配列を挟む領域を欠失させる。neomycin耐性遺伝子のみを削った(I型欠失)相同組み換えES細胞第7エクソンとneomycin耐性遺伝子を削った(II型欠失)相同組み換えES細胞を用いてキメラマウスの作製を行い、さらに交配によりヘテロマウス(I型欠失-TELflox/WT、II型欠失-TELΔ/WT)を得る。

1.TEL Tools Manufacturer: wild-type TEL and TEL Tools・ネガティブHLH (helix-loop-helix) ΔHLHをGATA-1プロモーター下に発成するトランスジェニックマウスをそれぞれ 3ラインずつした.しかしながら, ウエスタン analysis, immunosedimentation method RT-PCR method により発开がconfirmation されなかったため, separate のラインを production した. From now on, it will be used for F1 individual testing, blood calculation, bone and bone shape observation, and various types of tools. It is a liquid culture system that induces differentiation of 実験 and コロニー and forms 実験を行うpredetermined である.さらに、マイクロアレイanalytics により漝子をExplorationする. 2.TEL ノックアウトマウスのProduced by: マウスTEL 伝子の The 6th エクソン~The 8th エクソンの一をneomycin endurance legacy伝子およびIRES-GFP remains 伝子で putき Change えたターゲッティングベクターをConstructionし, the same group of みchange えbody ESを1ラインgetた.ヘテロマウスを Use the いてGFPを indicator and the fetal period のTEL の発 appear part を明らかにするとともに、ノックアウトマウスを用いて生死死のレスキュー実験を行う. 3.TEL コンディショナルマウスのProduced by: マウスTEL 伝子の第7エクソンの両ENDとそれに続くn The eomycin resistance is maintained in the Lox-P combination and is inserted into the system. The ES cells were introduced into the same group and the body was exchanged according to the policy.さらに, この Same group みchange えbody にpMC1-Cre ベクターをImport し, Lox-P arrangement を抟む区を owed させる. Neomycin resistance test (type I defect) is the same as the group. ES cells No. 7 neomycin resistance test (type II defect) is the same group. ES cells are produced using ES cells and are mated with ES cells using ES cells.ス(Type I loss-TELflox/WT, Type II loss-TELΔ/WT)をgetる.