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発生工学的手法を用いた白血病関連転写因子TELの機能解析

利用发育工程方法分析白血病相关转录因子TEL的功能

基本信息

批准号：
14657248
负责人：
三谷絹子
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Dokkyo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

1.TELトランスジェニックマウスの作製:野生型TEL及びそのドミナント・ネガティブHLH (helix-loop-helix)欠失変異体ΔHLHをGATA-1プロモーター下に発現するトランスジェニックマウスをそれぞれ3ラインずつ作製した。しかしながら、ウエスタン解析、免疫沈降法RT-PCR法により発現が確認されなかったため、別のラインを作製した。今後F1個体について、血算、骨髄の形態観察、各種サイトカインを用いた液体培養系での分化誘導実験、コロニー形成実験を行う予定である。さらに、マイクロアレイ解析により標的遺伝子を探索する。2.TELノックアウトマウスの作製:マウスTEL遺伝子の第6エクソン〜第8エクソンの一部をneomycin耐性遺伝子およびIRES-GFP遺伝子で置き換えたターゲッティングベクターを構築し、相同組み換え体ESを1ライン得た。ヘテロマウスを用いてGFPを指標に胎生期のTELの発現部位を明らかにするとともに、ノックアウトマウスを用いて胎生致死のレスキュー実験を行う。3.TELコンディショナルマウスの作製:マウスTEL遺伝子の第7エクソンの両端とそれに続くneomycin耐性遺伝子の端にLox-P配列を挿入したターゲッティングベクターを作製中である。これをES細胞に遺伝子導入し相同組み換え体を得る方針である。さらに、この相同組み換え体にpMC1-Creベクターを導入し、Lox-P配列を挟む領域を欠失させる。neomycin耐性遺伝子のみを削った(I型欠失)相同組み換えES細胞第7エクソンとneomycin耐性遺伝子を削った(II型欠失)相同組み換えES細胞を用いてキメラマウスの作製を行い、さらに交配によりヘテロマウス(I型欠失-TELflox/WT、II型欠失-TELΔ/WT)を得る。

1. Operation of TEL: Wild type TEL and helix-loop helix HLH (helix-loop-helix) variant ΔHLH is GATA-1 variant. Analysis, immunoprecipitation, RT-PCR, detection, identification, and control of different species. In the future, F1 individuals will be selected, blood counting, morphological observation of bone marrow, differentiation induction of liquid culture systems, and development of bone marrow formation will be determined. This is the first time I've ever seen a woman. 2. TEL The use of GFP indicates the location of TEL development in the prenatal period. 3. TEL This is the first time we've seen this. Today, the same group of people in the PMC1-Cre category introduced, Lox-P alignment, and other areas missing. The same group of neomycin resistant genes is replaced with the same group of neomycin resistant genes (type I deficiency). The 7th exon of ES cells is replaced with the same group of neomycin resistant genes (type II deficiency). The same group of ES cells is replaced with the same group of neomycin resistant genes (type I deficiency-TELflox/WT, type II deficiency-TELΔ/WT).