基本転写因子異常による造血幹細胞腫瘍化の機構の解析

基础转录因子异常导致造血干细胞肿瘤发生机制分析

• 批准号: 09250204
• 负责人: 三谷 絹子
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09250204/
• 关键词: RNAポリメラーゼII伸長因子; MEN; t(11;19); 白血病; AP‐1活性; 転写伸長因子

進展期MDS症例に観察されるt(11;19)(q23;p13.1)の分子解析を行うことにより、新規融合遺伝子MLL/MENのクローニングを行った。MLLはAT hooksと2つのzinc finger domainsを有する転写因子であり、MENは基本転写因子RNAポリメラーゼII伸長因子をコードしている。MENに対するポリタロ-ナル抗体を作成し、MENが80kDの蛋白質として核内に発現していることを明らかにした。基本転写因子MENの異常発現が白血病発症に至る機序を明らかにする目的で、MENの造腫瘍活性を以下の実験で証明した。ラットの線維芽細胞Rat1にMENを遺伝子導入すると、形態学的変化は観察されていないものの、コロニー形成能の増強及び血清要求性の低下が観察された。これらの効果はMENのc末領域に存在するlysine‐rich domainを失った欠失変異体では観察されなかった。また、MENを発現しているRat1細胞ではmock細胞に比較してFOS蛋白質の発現が亢進していた。さらに、TRE siteをプロモーター領域に有するレポーターを用いたルシフェラーゼ・アッセイの結果、MENを発現しているRat1細胞ではAP‐1活性が亢進していることが明らかになった。これらの効果はすべてMENのlysine‐rich domainに依存性があった。run‐Off assayにより、MENはlysine‐rich domain依存性にfos遺伝子に対する転写伸長を活性化することが明らかになり、これがFOS蛋白質発現の亢進の原因であると考えられた。従って、MENの造腫瘍活性はFOSの発現亢進を介するAP‐1活性の増強によるものであることが予測された。

The molecular analysis of advanced MDS cases was performed by t(11;19)(q23;p13.1), and the new fusion gene MLL/MEN was performed. MLL has AT hooks and 2 zinc finger domains. Men's 80kD protein is produced in the middle of the day. The aberrant expression of the essential transcription factor MEN was demonstrated to elucidate the mechanism of leukemia development and the tumor-producing activity of MEN. The expression of mRNA in RAT1 cells, morphological changes, enhancement of protein formation and decrease of serum requirement were observed. The result is that there is a missing lysine rich domain in MEN. The expression of FOS protein in Rat1 cells was increased compared with mock cells. In addition, the TRE site is located in the middle of the field. As a result, MEN is found in Rat1 cells. AP-1 activity is increased. This is the result of a lysine‐rich domain dependency on MEN. Run‐Off assay, MEN, lysine‐rich domain dependency, FOS protein activation, and the causes of FOS protein activation. The tumor-forming activity of MEN is mediated by the increase of AP-1 activity.

项目成果

Tanaka K: "The AML1/ETO(MTG8)and AML1/Evi‐1 leukemia‐associated chimeric oncoproteins accumulate PEBP2beta(CBFbeta)in the nucleus more efficiently than wild‐type AML1" Blood in press.

Tanaka K：“与野生型 AML1 相比，AML1/ETO (MTG8) 和 AML1/Evi-1 白血病相关嵌合癌蛋白在细胞核中积累 PEBP2beta (CBFbeta) 的效率更高”《Blood》。

Hirai, H.: "Recent progress in molecular mec-hanisms of leukemogenesis:The cyclin-de-pendent kinase4-inhibitor gene in human leukemias." Leukemia. 11. 358-360 (1997)

Hirai, H.：“白血病发生分子机制的最新进展：人类白血病中细胞周期蛋白依赖性激酶4抑制剂基因。”

Mitani, K.: "Leukemogenesis by the chromosomaltranslocatioms." Leukemia. 11. 294-296 (1997)

Mitani, K.：“染色体易位导致的白血病发生。”

Hosoya, N.: "Frameshift Mutations of the hMSH6Gene in Human Leukemia Cell Lines." JJCR. 89. 33-39 (1998)

Hosoya, N.：“人类白血病细胞系中 hMSH6 基因的移码突变。”

Ueno, H.: "The phosphatidylinositol3 kinase pathway is required for the survival of leukocyte tyrosine kinase." Oncogene. 14. 3067-3072 (1997)

Ueno, H.：“磷脂酰肌醇 3 激酶途径是白细胞酪氨酸激酶存活所必需的。”