基本転写因子異常による造血幹細胞腫瘍化の機構の解析

基础转录因子异常导致造血干细胞肿瘤发生机制分析

• 批准号: 09250204
• 负责人: 三谷 絹子
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09250204/
• 关键词: RNAポリメラーゼII伸長因子; MEN; t(11;19); 白血病; AP‐1活性; 転写伸長因子

進展期MDS症例に観察されるt(11;19)(q23;p13.1)の分子解析を行うことにより、新規融合遺伝子MLL/MENのクローニングを行った。MLLはAT hooksと2つのzinc finger domainsを有する転写因子であり、MENは基本転写因子RNAポリメラーゼII伸長因子をコードしている。MENに対するポリタロ-ナル抗体を作成し、MENが80kDの蛋白質として核内に発現していることを明らかにした。基本転写因子MENの異常発現が白血病発症に至る機序を明らかにする目的で、MENの造腫瘍活性を以下の実験で証明した。ラットの線維芽細胞Rat1にMENを遺伝子導入すると、形態学的変化は観察されていないものの、コロニー形成能の増強及び血清要求性の低下が観察された。これらの効果はMENのc末領域に存在するlysine‐rich domainを失った欠失変異体では観察されなかった。また、MENを発現しているRat1細胞ではmock細胞に比較してFOS蛋白質の発現が亢進していた。さらに、TRE siteをプロモーター領域に有するレポーターを用いたルシフェラーゼ・アッセイの結果、MENを発現しているRat1細胞ではAP‐1活性が亢進していることが明らかになった。これらの効果はすべてMENのlysine‐rich domainに依存性があった。run‐Off assayにより、MENはlysine‐rich domain依存性にfos遺伝子に対する転写伸長を活性化することが明らかになり、これがFOS蛋白質発現の亢進の原因であると考えられた。従って、MENの造腫瘍活性はFOSの発現亢進を介するAP‐1活性の増強によるものであることが予測された。

Advanced cases with MDS に 観 examine さ れ る t (11; 19) (q23; p13.1) の molecular line analytical を う こ と に よ り, new rules but 伝 MLL/MEN の ク ロ ー ニ ン グ を line っ た. MLL は AT hooks と 2 つ の any zinc finger domains を have す る planning write factor で あ り, MEN は basic planning write factor RNA ポ リ メ ラ ー ゼ elongation factor II を コ ー ド し て い る. MEN に す seaborne る ポ リ タ ロ - ナ ル antibody を make し, MEN が 80 kd protein の と し て in nuclei に 発 now し て い る こ と を Ming ら か に し た. Basic planning write factor MEN の unusual 発 now 発 が leukemia disease に to る machine sequence を Ming ら か に す る purpose で, MEN made swollen sores の activity under を の be 験 で prove し た. ラ ッ ト の line d bud cells Rat1 に MEN を posthumous son 伝 import す る と, morphological variations of は 観 examine さ れ て い な い も の の, コ ロ ニ ー form strong and び の raised serum sex low の が 観 examine さ れ た. こ れ ら の unseen fruit は MEN に の c at the end of the field exist す る lysine ‐ rich domain を lost っ た owe lost - variant で は 観 examine さ れ な か っ た. ま た, MEN を 発 now し て い る Rat1 cells で は mock cell に compare し て FOS protein の 発 now が hyperthyroidism し て い た. さ ら に, TRE site を プ ロ モ ー タ に ー field have す る レ ポ ー タ ー を with い た ル シ フ ェ ラ ー ゼ · ア ッ セ イ の results, MEN を 発 now し て い る Rat1 cells で は AP ‐ 1 active が hyperthyroidism し て い る こ と が Ming ら か に な っ た. The effect of に れら <s:1> is すべてMEN <s:1> lysine-rich domainに dependency があった. Run ‐ Off assay に よ り, MEN は lysine ‐ rich domain dependence に fos posthumous son 伝 に す seaborne る planning write elongation を activeness す る こ と が Ming ら か に な り, こ れ が fos protein 発 is の hyperthyroidism の reason で あ る と exam え ら れ た. 従 っ て, MEN made swollen sores の active は FOS の 発 hyperthyroidism を interface now す る AP ‐ 1 active の raised strong に よ る も の で あ る こ と が be さ れ た.

项目成果

Tanaka K: "The AML1/ETO(MTG8)and AML1/Evi‐1 leukemia‐associated chimeric oncoproteins accumulate PEBP2beta(CBFbeta)in the nucleus more efficiently than wild‐type AML1" Blood in press.

Tanaka K：“与野生型 AML1 相比，AML1/ETO (MTG8) 和 AML1/Evi-1 白血病相关嵌合癌蛋白在细胞核中积累 PEBP2beta (CBFbeta) 的效率更高”《Blood》。

Hirai, H.: "Recent progress in molecular mec-hanisms of leukemogenesis:The cyclin-de-pendent kinase4-inhibitor gene in human leukemias." Leukemia. 11. 358-360 (1997)

Hirai, H.：“白血病发生分子机制的最新进展：人类白血病中细胞周期蛋白依赖性激酶4抑制剂基因。”

Mitani, K.: "Leukemogenesis by the chromosomaltranslocatioms." Leukemia. 11. 294-296 (1997)

Mitani, K.：“染色体易位导致的白血病发生。”

Hosoya, N.: "Frameshift Mutations of the hMSH6Gene in Human Leukemia Cell Lines." JJCR. 89. 33-39 (1998)

Hosoya, N.：“人类白血病细胞系中 hMSH6 基因的移码突变。”

Yamagata T: "Triple synergism of human T-lymphotropic virus type l-encoded Tax,GATA-binding protein,and AP-1 is required for constitutive expression of the interleukin-5 gene in adult T-cell leukemia cells." Mol.Cell.Biol.17. 4272-4281 (1997)

Yamagata T：“成人 T 细胞白血病细胞中白细胞介素 5 基因的组成型表达需要人类 T 淋巴细胞病毒 L 型编码的 Tax、GATA 结合蛋白和 AP-1 的三重协同作用。”