基本転写因子異常による造血幹細胞腫瘍化の機構の解析

基础转录因子异常导致造血干细胞肿瘤发生机制分析

基本信息

批准号：
09250204
负责人：
三谷絹子
金额：
$ 1.47万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09250204/
关键词：
RNAポリメラーゼII伸長因子 MEN t(11;19)白血病 AP‐1活性転写伸長因子

项目摘要

進展期MDS症例に観察されるt(11;19)(q23;p13.1)の分子解析を行うことにより、新規融合遺伝子MLL/MENのクローニングを行った。MLLはAT hooksと2つのzinc finger domainsを有する転写因子であり、MENは基本転写因子RNAポリメラーゼII伸長因子をコードしている。MENに対するポリタロ-ナル抗体を作成し、MENが80kDの蛋白質として核内に発現していることを明らかにした。基本転写因子MENの異常発現が白血病発症に至る機序を明らかにする目的で、MENの造腫瘍活性を以下の実験で証明した。ラットの線維芽細胞Rat1にMENを遺伝子導入すると、形態学的変化は観察されていないものの、コロニー形成能の増強及び血清要求性の低下が観察された。これらの効果はMENのc末領域に存在するlysine‐rich domainを失った欠失変異体では観察されなかった。また、MENを発現しているRat1細胞ではmock細胞に比較してFOS蛋白質の発現が亢進していた。さらに、TRE siteをプロモーター領域に有するレポーターを用いたルシフェラーゼ・アッセイの結果、MENを発現しているRat1細胞ではAP‐1活性が亢進していることが明らかになった。これらの効果はすべてMENのlysine‐rich domainに依存性があった。run‐Off assayにより、MENはlysine‐rich domain依存性にfos遺伝子に対する転写伸長を活性化することが明らかになり、これがFOS蛋白質発現の亢進の原因であると考えられた。従って、MENの造腫瘍活性はFOSの発現亢進を介するAP‐1活性の増強によるものであることが予測された。

通过在晚期MD的情况下观察到的T（11; 19）（Q23; P13.1）的分子分析，将新型的融合基因MLL/男性克隆。 MLL是一个转录因子，具有AT钩和两个锌指域，男性编码基底转录因子RNA聚合酶II伸长因子。产生了针对男性的多肠隆抗体，并揭示了男性在细胞核中以80kD蛋白的形式表达。为了阐明基本转录因子男性的异常表达导致白血病发作的机制，我们证明了男性在以下实验中的致瘤活性：将男性转染到大鼠成纤维细胞大鼠中，没有显示形态变化，但增加了菌落形成能力和减少的血清需求。在失去男性C末端区域中存在的富含赖氨酸的结构域的缺失突变体中都没有观察到这些影响。此外，与模拟细胞相比，表达男性的Rat1细胞表现出FOS蛋白的表达增加。此外，使用记者在启动子区域中使用TRE位点的记者的荧光素酶测定显示，表达男性的Rat1细胞中AP-1活性得到了增强。所有这些影响都取决于男性富含赖氨酸的领域。径流测定法表明，男性以富含赖氨酸的结构依赖性方式激活FOS基因的转录伸长，这被认为是FOS蛋白表达增加的原因。因此，据预测，男性的致瘤活性是由于FOS的表达增加而增加了AP-1的活性。