培養肺胞上皮細胞気管内注入による肺病変修復促進に関する分子生物学的検索

气管内注射培养肺泡上皮细胞促进肺部病变修复的分子生物学研究

• 批准号: 14657394
• 负责人: 須加原 一博
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: University of the Ryukyus
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657394/
• 关键词: 急性肺傷害; 創傷治癒; サイトカイン; 肺胞上皮細胞; 培養細胞; 骨髄幹細胞; 分子生物学

1.培養肺胞II型上皮細胞気管内投与による投与(培養)細胞の動態-これまでの研究成果から、(1)近交系ラット間の方が細胞生着率が良い(投与細胞の20〜30%)。(2)細胞外マトリックと培養細胞の相互作用が培養細胞機能保持に重要(Engelbreth-Holm-Swarm腫瘍細胞の細胞外マトリックスがよい)。(3)4-diamino-phenylindole(DAPI)やlipophilic dialkylcarbocyanines(Dil or DiD)を用いて、投与細胞と組織細胞の区別が可能であること、(4)細胞増殖因子であるKGFで、12時間培養細胞を刺激して気管内投与すると、両方の細胞に増殖反応がみられ、投与細胞の約30%が生着すること、(5)KGF投与後2〜3日目に最大増殖能(BrdU取り込み最大)を示し、イオン輸送能もそれとよく相関することなどが明らかになった。2.呼吸不全動物肺での培養細胞気管内投与-エンドトキシン、ブレオマイシンや塩酸による肺障害ラットについて、KGF刺激培養肺胞II型上皮細胞を気管内投与し、その投与細胞の動態と肺病変の変化を検索した。障害肺に肺水腫様変化が強いために、投与細胞が肺胞レベルまで到達しにくく、生着率が悪い。そのため、障害後2〜3日目に人工サーファクタントを投与してみた。少し生着率が高くなった。最適な投与方法や時期について検討し、5〜7日目に投与すると効果大。3.KGFおよび人工サーファクタントの併用効果-上記障害ラット肺について、KGFと人工サーファクタントを同時に投与し、肺水腫液の吸収度を検索すると、吸収促進が示唆された。この方法を応用し研究を進めている。4.骨髄幹細胞からのlung stem cellsの分離と病変修復への応用-ラットに5-FUを投与し、骨髄を刺激し、骨髄細胞を採取。培養し血球成分を除いた骨髄幹細胞をBrdUラベルし、静脈投与。肺胞への生着度を検索。ブレオマイシン肺傷害への生着度を比較検討し、傷害肺への生着が高いことがわかった。これらがKGFに反応するか検索中。反応する場合は、病変修復作用があるか検索を計画している。さらに、GFP(green-fluorescence protein)ラットを使用予定。5.FGF-10およびFGF-18による障害抑制-FGF-10およびFGF-18が新たな肺胞II型上皮細胞増殖因子として作用するため、KGFとの相乗効果などについて検索するとともに、細胞増殖による障害抑制効果についても検索を進めている。6.HGFベクターを用いた障害抑制-培養細胞、正常ラット肺および呼吸不全動物肺へのHGFベクターの気管内投与の効果について検索中で、培養細胞への移入率、呼吸不全動物肺での移入率など明らかにする予定である。

1. Cultured pneumocyte type II epithelial cells. Dynamic research results of intratubular administration of administered (cultured) cells. (1) The cell proliferation rate of the inbred strain Rinotor is good (20 to 30% of administered cells). (2) The interaction of extracellular materials with cultured cells is important for maintaining the function of cultured cells (Engelbreth-Holm-Swarm extracellular materials with tumor cells). (3)4-diamino-phenylindole(DAPI)やlipophilic dialkylcarbocyanines(Dil or The use of DiD), the possibility of distinguishing between administered cells and tissue cells, (4) the possibility of cell proliferation factorsるKGFで、12-hour culture of cellsをstimulationして気 intratubular administrationすると、両squareのcellsにproliferationreactionがみられ, Approximately 30% of the administered cells were infected, (5) The maximum proliferation capacity was reached 2 to 3 days after KGF administration (Br dU takes the maximum value of り込み) をshows し, and イオン transports energy もそれとよくrelated することなどが明らかになった. 2. Intratubular administration of cultured cells in the lungs of animals with respiratory insufficiency - エンドトキシン, ブレオマイシンや塩 acid による lung impairment ラットについて, KGF stimulates cultured pneumocyte type II epithelial cells, intratubular administration, そのadministration of cells, and dynamic changes in lung disease. Pulmonary edema and pulmonary edema can be cured in a strong way, and the cells injected into the lungs can reach the lungs easily, and the growth rate is low.そのため, artificial サーファクタントを vote for してみた 2 to 3 days after the obstacle. The birth rate is low and the birth rate is high. The most suitable method of administration is to administer the drug every 5 to 7 days to achieve the greatest effect. 3. The combined effect of KGF's Artificial Strainer and KGF's - the above-mentioned obstacles to Haze's lungs and KGF's The workman's medicine is administered at the same time, the absorption rate of pulmonary edema fluid is measured, and the absorption promotion method is used.このmethodを応用し研究を进めている. 4. Isolation of bone stem cells, repair of disease, injection of -Ranodon 5-FU, stimulation of bone, and collection of bone cells. The cultured blood cell components and bone marrow stem cells were cultured and administered intravenously. The lung cells are born with を検 rope.ブレオマイシン lung damage への生生出を 検question し, lung damage への生が高いことがわかった.これらがKGFに濜するか検検中. The purpose of the reaction is the occasion, and the repair effect of the disease is the plan. The use of さらに, GFP (green-fluorescence protein) ラットを is scheduled. 5.FGF-10およびFGF-18によるBarrier Inhibitor-FGF-10およびFGF-18が新たなPneumocyte type II epithelial cell proliferation factor としてeffectするため、KGFとの multiplying effectなどについて検SOするとともに、Cell proliferation and barrier inhibitory effect についても検SO を入めている. 6. HGF ベクターを use いた barrier inhibition - cultured cells, normal ラットlung および respiratory insufficiency animal lung へのHGF ベクターの氰 tube The effect of internal administration is determined, the transplantation rate of cultured cells, and the transplantation rate of lungs of animals with respiratory insufficiency are determined.

项目成果

T.Oshiro, K.Sugahara, et al.: "Antenatal treatment with vitamin A reduces the incidence of nitrofen-induced congenital diaphragmatic hernia but decreases lung growth"Am J Respir Crit Care Med. 167(in press). (2003)

T.Oshiro、K.Sugahara 等人：“用维生素 A 进行产前治疗可降低除草醚诱发的先天性膈疝的发生率，但会降低肺部生长”Am J Respir Crit Care Med。

K.Sugahara, et al.: "The roles of alveolar type II epithelial cells in inflammation and repair process of acute lung injury"J Jpn Med Soc Biol Interface. 33. 5-9 (2002)

K.Sugahara等：“肺泡II型上皮细胞在急性肺损伤炎症和修复过程中的作用”J Jpn Med Soc Biol Interface。

S.Nakamura, K.Sugahara, et al.: "Effect of GABA agents on morphine induced spastic paraparesis after a non-injurious interval of spinal cord ischemia in rats"Anesthesia & Analgesia. 94. 1389-1395 (2002)

S.Nakamura、K.Sugahara 等人：“GABA 药物对吗啡引起的大鼠脊髓缺血非损伤性间歇期痉挛性截瘫的影响”麻醉

T.Oshiro, K.Sugahara, et al.: "Effects of vitamin A and growth factors on the lung of drug-induced congenital diaphragmatic hernia (CDH)"J Jpn Med Soc Biol Interface. 33. 67-68 (2002)

T.Oshiro、K.Sugahara 等人：“维生素 A 和生长因子对药物引起的先天性膈疝 (CDH) 肺部的影响”J Jpn Med Soc Biol Interface。

T.Kuroiwa, et al.: "Brain Edema XII"Springer-Verlag Wien (in press). (2003)

T.Kuroiwa 等人：“脑水肿 XII”Springer-Verlag Wien（印刷中）。