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培養肺胞上皮細胞気管内注入による肺病変修復促進の分子生物学的検索-水腫液吸収促進および人工サーファクタント併用による障害後細胞注入効果

气管内注射培养肺泡上皮细胞促进肺病灶修复的分子生物学研究-损伤后细胞注射促进水肿液吸收与人工表面活性剂联合作用

基本信息

批准号：
09877308
负责人：
須加原一博
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.培養肺胞II型上皮細胞気管内投与による投与細胞の動態-ラット肺より肺胞II型上皮細胞を分離し、細胞が培養皿に付着しないようにバクテオロジカルデイシュに一日培養。この時細胞機能を維持するため、Engelbreth-Holm-Swarm(EHS)腫瘍細胞外マトリックスをLab Techを用いて培養液中に浸して保持し、4-diamino-2-phenylindole(DAPl)を用いて細胞核を染色してから他のラット肺に気管内投与した。数日後ラット肺を凍結固定し、凍結切片を作成して蛍光顕微鏡にて観察すると投与した細胞が塊を作って肺胞壁に付着しており、形態的に以前の方法より活性の高い生きた細胞が確認された。DAPlでは凍結切片が必要なため、lipophilicdialkylcarbocyanines(Dil or DiD)を用いて、培養細胞を染色し気管内投与し、組織をパラホルムアルデハイドで固定し観察。投与細胞と組織細胞の区別が充分可能なことを確認できた。培養細胞を肺胞上皮細胞増殖因子であるKGFで、12時間刺激しDAPlあるいはDilで染色後、気管内投与してその動態を検索し、同様の結果を得ている。少し細胞障害があると思われるため、染色しない培養細胞を気管内投与し、投与肺を組織学的、電顕的に検索している。2.呼吸不全動物肺での細胞形態変化-エンドトキシン、ブレオマイシンや塩酸による障害ラットを作製し、KGFで刺激した培養肺胞II型上皮細胞を呼吸不全動物ラット肺に気管内投与し、その投与細胞の動態を検索しているが、肺水腫などが強いためか肺胞壁まで達していなく付着した細胞が少ない。最適投与時期を検索するため、経時的な変化を観察したが、4〜7日頃に投与した方が付着細胞は多いようだ。障害が進行しているため、付着細胞が脱落するのも観察された。3.KGF刺激培養肺胞上皮細胞と人工サーファクタント併用による肺障害抑制効果-肺障害後早期に人工サーファクタントを投与しその後培養細胞を投与すると付着細胞の増加がみられ、障害修復の促進が期待され現在検索中である。4.今後の展望-肺障害作製後人工呼吸管理を併用して(初期の肺水腫を抑えて)KGF刺激培養細胞を投与する研究も進行している。さらに、アデノウイルスを用いたgene transferによる研究も検討し始めている。

1. Cultured lung type II epithelial cells were cultured in vitro for one day. Cell function is maintained during this time. Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) tumor cells are immersed in Lab Tech culture medium and maintained in 4-diamino-2-phenylene (DAPl) medium. Cell nuclei are stained and other cells are injected into lung tubes. A few days later, the frozen lung was frozen and fixed, and the frozen section was prepared. The cells were observed by light microscopy. The cells were isolated from the lung cell wall. The cells were identified by previous methods. DAPl is necessary for frozen sections, lipophilicdialkylcarbocyanines (Dil or DiD) are used for staining, cultured cells are injected into tubes, and tissues are fixed for observation. The difference between cells and tissues is fully possible. KGF, DAPl and Dil staining were performed on cultured cells, and the results were obtained after administration of DAPl and Dil. The cells were cultured in vitro, histologically and electrically. 2. Cell morphological changes in lungs of respiratory incomplete animals were stimulated by KGF, and lung type II epithelial cells were cultured in vitro. Pulmonary edema increased in intensity and decreased in number of cells. The optimal time for investment is 4 to 7 days after the initial investment, and the optimal time for investment is 4 to 7 days. The damage is ongoing, and the cells are shedding. 3. KGF stimulation of cultured lung epithelial cells and artificial treatment of lung injury inhibition effect-early stage after lung injury artificial treatment of lung injury and post-treatment of cultured cells, increase of cell growth, promotion of injury repair and expectation of present model. 4. Future prospects- The gene transfer process was initiated in the study.