コラ-ゲン特異的ストレス蛋白質HSP47の構造と機能

胶原蛋白特异性应激蛋白HSP47的结构和功能

• 批准号: 03833017
• 负责人: 平芳 一法
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03833017/
• 关键词: ストレス蛋白質; コラ-ゲン; 分子シャペロン

報告者らがニワトリ胎児繊維芽細胞より新しく発見した分子量47,000のストレス蛋白質HSP47は、小胞体に局在し、コラ-ゲンに結合能を有する。HSP47はコラ-ゲンとの挙動、細胞内の分布、増減の経時的変化、in vitroでの結合様式からコラ-ゲンが成熟する過程で、その特異的分子シャペロンとして機能しているものと考えられる。この分子がコラ-ゲン特異的分子シャペロンとして機能している事を証明する第一段階として、HSP47のコラ-ゲン結合部位の同定を試みた。マウス繊維芽細胞より得たcDNAを出発材料とし、大腸菌を用いた発現系を利用したin vitroアッセイ系を構築した。大腸菌の発現系には、強力な発現能を示すラムダファ-ジ由来のPLプロモ-タ-を有するpKS26を用いた。発現に供したcDNAは、全長及び欠損変異である。欠損変異は、アミノ末端を削ったもの、カルボキシル末端を削ったもの及び内部に欠損を有するものを作成した。大腸菌で発現させたところ多くの蛋白質は、inclusion bodyに取り込まれてしまった。これは、おそらく強力なプロモ-タ-のために蛋白質が過剰に発現してしまった事によるものと考えられる。発現の条件を少し悪くする事で可溶画分に多くの蛋白質を回収する事が可能となった。こうして得たHSP47およびその変異体をゼラチンセファロ-スカラムにかけゼラチンに対する結合能を調べた。ゼラチンは、コラ-ゲンの変性物であり、HSP47は、コラ-ゲンに対する結合能を同等の結合能を有する。現在までのところでは、カルボキシル末端側を削ったものでは、結合能に全く影響を及ぼさずアミノ末端側の欠損が結合能に影響を与えるらしい事までが明らかになった。今後さらに細かい欠損変異を作成し、詳細な解析を試みるつもりである。

Reporter ら が ニ ワ ト リ tire where 繊 d bud cells よ り new し く 発 see し た molecular weight 47000 の ス ト レ ス protein HSP47 は, small cell body に bureau in し, コ ラ - ゲ ン に binding energy を have す る. HSP47 は コ ラ - ゲ ン と の 挙 move, intracellular の distribution, good reduction の 経 of variations, the in vitro で の combined with others in type か ら コ ラ - ゲ ン が mature す で る process, そ の specific molecular シ ャ ペ ロ ン と し て function し て い る も の と exam え ら れ る. こ の molecular が コ ラ - ゲ ン specific molecular シ ャ ペ ロ ン と し て function し て い を る things prove す る first Duan Jie と し て, HSP47 の コ ラ - ゲ ン combining site の with fixed を try み た. マ ウ ス 繊 d bud cells よ り have た cDNA を 発 material と し, coliform を い た 発 department を now use し た in vitro ア ッ セ イ department を build し た. Coliform の 発 now is に は, powerful な 発 can now を shown す ラ ム ダ フ ァ - ジ origin の PL プ ロ モ タ - を have す る pKS26 を with い た. The occurrence of に for the たcDNA た, full-length and び underdamaged variations である. Owe loss - different は, ア ミ ノ end を cut っ た も の, カ ル ボ キ シ ル end を cut っ た も の and internal に owe loss を び す る も の を made し た. Coliform bacteria で present させたと まった ろ ろ many く <s:1> protein, inclusion bodyに take 込まれて 込まれて まった. こ れ は, お そ ら く powerful な プ ロ モ タ - の た め に protein が through turning に 発 now し て し ま っ た matter に よ る も の と exam え ら れ る. 発 の conditions now less を し 悪 く す る matter で soluble draw more than に く の protein を back 収 す が る things may と な っ た. こ う し て have た HSP47 お よ び そ の - variant を ゼ ラ チ ン セ フ ァ ロ - ス カ ラ ム に か け ゼ ラ チ ン に す seaborne る binding energy を adjustable べ た. ゼ ラ チ ン は, コ ラ - ゲ ン の - sexual content で あ り, HSP47 は, コ ラ - ゲ ン に す seaborne る binding energy を equal の binding energy を have す る. Now ま で の と こ ろ で は, カ ル ボ キ シ ル end side を cut っ た も の で は, binding energy に く influence を and all ぼ さ ず ア ミ ノ end side の owe loss が binding energy に influence を and え る ら し about い ま で が Ming ら か に な っ た. In the future, さらに will be made into <s:1> and detailed な analysis を. For example, みる さらに さらに さらに さらに underloss variation を will be presented.

项目成果

Hirayoshi,K.: "HSP47:a TissueーSpecific,TransformationーSensitive,CollagenーBinding Heat Shock Protein of Chicken Embryo Fibroblasts." Molecular and Cellual Biology. 11. 4036-4044 (1991)

Hirayoshi, K.：“HSP47：鸡胚胎成纤维细胞的组织特异性、转化敏感、胶原蛋白结合热休克蛋白。” 11. 4036-4044 (1991)

Nakai,A.: "Inrolrement of The Stress Protein HSP47 in Procollagen Processing in The Endoplosmic Reticulum." Journal of Cell Biology. (1992)

Nakai,A.：“应激蛋白 HSP47 参与内质网原胶原加工”。

Takechi,H: "Molecular Cloning of Mouse HSP47,a CollasenーBinding Stress Protein,and Its Expression during The Differentiation of F9 Teratocavcinoma Cells" Enropcan Journal of Biolosical Chemistly. (1992)

Takechi, H：“小鼠 HSP47（一种胶原蛋白结合应激蛋白）的分子克隆及其在 F9 畸胎瘤细胞分化过程中的表达”Enropcan Journal of Biolosical Chemistly (1992)。