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標的遺伝子組換えにみられるジーンコンバージョンの解析

靶向基因重组中观察到的基因转换分析

基本信息

批准号：
05255209
负责人：
権藤洋一
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05255209/
关键词：
相同組換えジーンターゲッティングジーンコンバージョン

项目摘要

マウスES細胞CCE株のp53遺伝子のジーンターゲッティングを行ない、4タイプの組換え導入体を得た。導入実験を独立に2回行ない、得られた全G418耐性株をサザーン法にて解析した。1回目:G418耐性57株の内、相同組換え体13株、重複相同組換え体2株、ランダム導入体35株、ジーンコンバージョン型組換え体7株。2回目:G418耐性58株中、相同組換え体21株、重複相同組換え体2株、ランダム導入体30株、ジーンコンバージョン型組換え体5株であった。ゆえに、4つの導入パターンが、ほぼ同頻度で繰り返し得られることが明らかとなった。また、ジーンコンバージョン型組換え体は全て、5′側のみが相同組換え導入のパターンを示していた。異なるES細胞TT2株にも同様の導入実験を行ない、ほぼ同じ結果が得られ、再現性も確証できた。さらに、得られた全G418耐性株におけるベクターの導入構造を分子レベルにて解析し、次の組換え導入機序モデルを提唱することができた。()内には実際に観察された細胞株数を示している。まず、ベクターの導入は5′側の相同領域でホリデイ構造が作られる。この確率はランダムに導入してG418耐性となる場合の約半分(50/115)である。その場合、3′側相同領域でもホリデイ構造を作る確率が75%(38/50)で、2箇所の組換えにより相同組換えにより相同組換え体となる。ただし、このうち約10%(4/38)ハ、ベクターがタンデムに重複され重複相同組換体となる。さて残りの25%(12/50)では、3′側はホリデイ構造を作らずブルースクリプトも含めて、ターゲッティングベクターの5′末端と環状形で相同組換え導入される。これがジーンコンバージョン型組換え導入のモデルである。これは、Capecchiにより提唱されている1箇所の相同組換えによる「挿入型」ジーンターゲッティングに相当する。以上、組換え導入を分子レベルで解析した結果、再現性の高いジーンターゲッティング系が初めて確立でき、実験的に検証可能な遺伝子導入機序モデルも提唱できた。

The ES cell line CCE was transfected with p53 gene, and the recombinant plasmid was cloned into the cell line after 4 weeks. The whole G418-resistant strain was isolated and analyzed by the method of two independent cycles. 1 looking back: there were 57 strains of G418 tolerance, 13 strains of the same tissue strain, 2 strains of the same tissue strain, 35 strains of the same tissue strain, and 7 strains of the same tissue strain. 2Retrospection: 58 strains of G418 tolerance, 21 strains of the same tissue strain, 2 strains of the same tissue strain, 30 strains of the same tissue strain, and 5 strains of the same tissue strain were found in G418 tolerant strains. If you don't know what to do, if you don't know what to do, if you don't know what you're going to do, you'll have to know if you're going to get it. The whole system of the system is complete, and the system of the same system is the same as that of the 5 'group. The TT2 strain of the ES cell line was registered in the same cell line, and the results of the same test were confirmed. The whole G418-tolerant strain was cloned into the gene maker, the molecular marker was analyzed, and the secondary gene was introduced into the machine sequence. () the number of cells is shown by the number of cells. In the same field, in the same field as in the same field, in the same field. Please make sure that the percentage of patients with G418 patience is about half a minute (50 ppm 115). In the same field, the accuracy rate is 75% (38hip 50), and the accuracy rate is the same in the same area. Please check 10% (4 beat 38) for the same group, and reload the same group for the same group. The defects are 25% (12amp 50) and 3 'respectively. The same environment is registered at the end of the 5' end. This is not true. This is not true. This is not a good idea. This is the same as that of the same group of people in the same group, which is the same as that in the same group of people in the same group, which is the same as that in the same group of people. The above, the results of the molecular analysis, the results of the analysis of the results, the results of the analysis, the results, the results.