ショウジョバエ神経筋接合部をモデルとしたシナップス形成機構の遺伝学的解析

以果蝇神经肌肉接头为模型的突触形成机制的遗传分析

基本信息

批准号：
05263205
负责人：
吉原基二郎
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.エンハンサートラップ法による神経筋接合部形成に異常を持つ突然変異体の探索(吉原担当)我々は、神経筋接合部形成に働いている分子を遺伝学的に同定する目的で、エンハンサートラップ系統のスクリーニングを行っている。この目的のために、(1)運動神経細胞あるいは筋細胞での発現が見られる(2)孵化不能、即ち、致死である、という二つの基準を満たすものを候補として選択している。神経軸索でもレポーター遺伝子の産物が見られるKZTRAPの挿入系統を樹立する作業を続けており、現在の所、400の挿入系統を樹立しているが、95系統が致死であった。1acZの発現についてはまだ調査中であるが、そのうちの1系統においてはCNSのニューロピル及び末梢へ向かう神経軸索で1acZが発現していた。この致死系統の詳細な解析はまだ行っていないが、このことから、我々の方法が上に述べた目的に対して有効であると考えられるので今後このスクリーニングを続け、神経筋接合部形成突然変異の候補とし、続いて形態学的手法及び電気生理学による解析を行う予定である。2.正常な神経筋接合部形成過程の記載(1)形態学的記載(吉原担当);神経筋接合部でのシナプス形成の過程を、主に抗HRP抗体を用いて光学顕微鏡のレベルで追跡した。また、電子顕微鏡を用いてシナプス形成の過程に於ける微細形態の変化を記述している(ミシガン州立大学Rheuben博士との共同研究)。(2)電気生理学的記載(城所担当);胚期において、神経筋接合部での自発的なシナプス電流の変化をwhole cell patch clamp法によって解析した。その結果、胚発生の後期(stage17)においてシナプス伝達の効率が大きく変化することが明らかになった。

1。在使用增强子陷阱法（Yoshiwara）中搜索神经肌肉连接形成异常的突变体，我们正在筛选增强子陷阱线，目的是遗传鉴定在神经肌肉连接形成中起作用的分子。为此，选择候选者作为符合两个标准的候选者：（1）运动神经元或肌肉细胞中的表达，以及（2）抗孵育的候选者，即致命。我们正在继续为Kztrap建立插入线，在该线路中也可以在神经轴突中找到记者基因产物，目前已经建立了400个插入线，其中95个致命。尽管1ACZ表达仍在研究中，但其中一条线在CNS中的神经膜和周围神经轴突中表达1ACZ。尽管尚未对这种致命谱系进行详细分析，但我们认为我们的方法对上述目的有效，我们将来将继续进行此筛查，因为它是神经肌肉连接形成突变的候选者，随后是形态学方法和电生理学分析。 2。正常神经肌肉结构过程的描述（1）形态描述（Yoshiwara负责）；在光学显微镜的水平下，主要使用抗HRP抗体，在神经肌肉连接处的突触形成过程。此外，电子显微镜用于描述突触形成过程中微型形态的变化（与密歇根州立大学Rheuben博士的合作研究）。（2）电生理描述（负责Jotosho）；在胚胎阶段，通过全细胞贴片夹法分析了神经肌肉连接处突触电流的自发变化。结果表明，在胚胎发育的后期（第17阶段），突触传播的效率显着变化。