ショウジョウバエ神経筋接合部をテデルとしたシナプス形成機構の遺伝学的解析

利用果蝇神经肌肉接头对突触形成机制进行遗传分析

基本信息

批准号：
06256203
负责人：
吉原基二郎
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.エンハンサートラップ法による神経筋接合部形成に異常を持つ突然変異体の探索(吉原担当)我々は、神経筋接合部形成に働いている分子を遺伝学的に同定する目的で、エンハンサートラップ系統のスクリーニングを行っている。この目的のために、(1)運動神経あるいは筋細胞での発現が見られる(2)孵化不能、即ち致死であるという二つの基準を満たすものを候補として選択している。神経軸索でもレポーター遺伝子の産物がみられるKZTRAPの挿入系統を樹立する作業を続けている。現在のところ、約1000系統を樹立し、その内、致死の240系統をX-gal染色によってスクリーニングしたところ、運動ニューロンで発現の見られる8系統と筋細胞で発現の見られる18系統を選び出した。今後、これらの系統を電気生理学的に解析し、シナプス形成異常の突然変異体を単離する予定である。正常な神経筋接合部形成過程の記述(1)形態学的記述(吉原担当)神経筋シナプス形成の過程を、抗HRP抗体と共焦点レーザー顕微鏡によって記述したところ、授精後16.5時間でbouton状のシナプスが形成され始めることがわかった。(2)電気生理学的記述(城所担当)昨年度に引き続いて、本年はさまざまなモードで胚期の筋細胞のpatch clampを行い、各stageでのchannelの性質を記述した。

1。在使用增强子陷阱法（Yoshiwara）中搜索神经肌肉连接形成异常的突变体，我们正在筛选增强子陷阱线，目的是遗传鉴定在神经肌肉连接形成中起作用的分子。为此，选择候选者作为符合两个标准的候选者：（1）运动神经或肌肉细胞中的表达，以及（2）孵育能力，即致命。我们将继续致力于为Kztrap建立插入线，在该线神经轴突中也发现了记者基因产物。目前，已经建立了大约1,000个菌株，并通过X-GAL染色筛选了240个致命菌株，并且在运动神经元中表达了八条线，并选择了18条线。将来，这些线将在电生理学上分析以分离突触异常的分离物。正常神经肌肉连接形成过程的描述（1）形态学描述（Yoshiwara负责）时，使用抗HRP抗体和共聚焦激光显微镜描述了神经肌肉突触形成的过程，发现Bouton-like Synapse在Enemenation后16.5小时开始形成。（2）去年以后的电生理描述（负责城堡），今年我们以各种模式进行了胚胎肌肉细胞的斑块夹，并描述了每个阶段的通道性质。