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ES細胞を用いた未知遺伝子の検索

使用 ES 细胞寻找未知基因

基本信息

批准号：
05275103
负责人：
山村研一
金额：
$ 204.16万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至 1996
项目状态：
已结题

项目摘要

遺伝子トラップ法において、ES細胞を浮游培養して胚様体を形成させる方法がスクリーニング系としてすぐれていること、この方法により4つの遺伝子を単離したが、3つは既知の1つは未知の遺伝子であり、効率よくマウス内在性遺伝子を単離できることを明らかにした。YACおよびBACをマウス受精卵に注入する方法を確立した。δクリスタリン遺伝子の転写因子として単離されたδEF-1について、C末端側の破壊マウスでは主に胸腺の異常が出現するが、完全欠損ではnotochordの異常に基づく椎間板の欠損が起こることがわかった。始原生殖細胞の増殖にはgp130が関与すること、そのリガンドは未知のものであることが推察された。始原生殖細胞の増殖に関与する蛋白キナーゼであるskyのリガンドがGas6であること、それは精巣の間質細胞で発現すること、steel factoe存在下で増職能を有することを明らかにした。メダカの胞胚を培養することにより確立したOLES1およびOLES2細胞において、初期胚のマーカーであるSSEA-1やEMA-1が発現していることがわかった。ゼブラフィッシュの胞胚期の細胞はキメラ形成能のあること、卵黄がbFGF,Wnt8を介してOtxを抑制し、それが中胚葉誘導に関連することを明らかにした。ニワトリにおいてen-2が視蓋原基尾側への投射に関与するが、エレクトロポレーションによる視蓋領域への遺伝子導入法を開発し、それを用いてen-2の上流にPax5、下流にRagsおよびElf1があることを明らかにした。YACはリニアーであるが、環状化したベクターの開発に成功した。また、rad51株を用いることにより、キメラ率が5-10%に低下することを見いだした。

The method of embryo formation by ES cell culture in suspension is described in detail below. The method of embryo formation by ES cell culture in suspension is described in detail below. The method of embryo formation by ES cell culture in suspension is described in detail below. YAC and BAC were established.δEF-1, δEF-1, δEF-1, Gp130 is the first time that a germ cell has been cloned. The growth of protogerm cells is related to protein production in the presence of a steel factoe. SSEA-1 and EMA-1 were developed in the early embryo culture of OLES1 and OLES2 cells. In the embryo stage, the cells were able to form the embryo, vitelline, bFGF,Wnt8, Otx, and mesodermal induction. It has become clear that the Newari en-2 is related to the projection of the caudal side of the optic cap primordium, and that a gene introduction method into the optic cap area within the Erector Posture has been developed and can be used in the upstream Pax5, downstream Rags, and Elf1 of the Newari en-2. YAC was successfully developed. 5-10% of the total number of plants in the plant