CATCH22症候群における遺伝子レベルでの発生機構の解析

CATCH22综合征遗传机制分析

基本信息

批准号：
09272213
负责人：
倉橋浩樹
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09272213/
关键词：
DiGeorge症候群 CATCH22 22q11 VNTR 共通欠失領域

项目摘要

CATCH22は染色体22q11の欠失を伴う先天奇形症候群である。種々の表現型があり、隣接遺伝子症候群と考えられている。この症候群の原因遺伝子の同定に向けて、共通欠失領域のゲノム解析を行った。ヒトゲノムコスミドライブラリーよりCATCH22欠失領域内に位置するコスミドクローンを単離し、その一部をコスミドコンテイグ化し、前年度の研究により同定した最小欠失領域をHCF2から849e9Rの約300kbに限定した。また、その領域の転写地図を作製した。その領域にはHCF2、CRKL、我々が単離したLZTR-1、がマップされた。さらに新規遺伝子の単離に向けて、複数の新規ESTを単離した。また、CATCH22は患者の大多数がde novoの、しかも共通の欠失で発症しているため、欠失の生じやすいゲノム構造が示唆される。この大多数の患者が示す共通欠失領域の断端を含む近位側、遠位側のYACクローンを同定した。遠位側のYACクローンより、コスミドライブラリーを作製し、コスミドコンテイグ化し、FISH、PFGE、サザン解析などの詳細な検討を行った。その結果、共通欠失領域の断端近傍には、数200kbにわたり、22q11特異的反復配列が存在することが判明した。これらはFISHにて欠失の近位側、遠位側両側にシグナルを出す。ただし、PFGEやサザン解析では、反復とこの領域の高度多型性のため欠失の断端の同定は困難であった。この領域には特徴的なVNTRが存在する。このVNTRは27bpの反復であり、遠位側では100コピー前後の反復が2コピー、近位側では20コピーのものがそれぞれのYACクローンにのっている。これらのVNTRを含むコスミドクローンでのFISHにより、元来約3Mb離れて存在するこれらのクローンが欠失により極めて近接して存在することが示された。VNTRのrecombigenicな性質に注目すると、欠失の発生する原因の有力な候補と考えられ、実際にrecombinationが発生するプロセスの解析をすすめている。

Catch22是一种先天性畸形综合征，删除了染色体22q11。有各种表型，被认为是相邻的遗传综合征。为了鉴定负责该综合征的基因，对公共缺失区域进行了基因组分析。从人类基因组宇宙文库中分离出位于捕获22缺失区域内的宇宙克隆，其中一部分是宇宙含量的，限制了在往年的研究中鉴定的最小删除区域，将大约300 kb的HCF2至849E9R。还准备了该区域的转录图。该区域用HCF2，CRKL和LZTR-1映射，我们分离了。另外，分离了多个新型EST，以帮助隔离新基因。此外，由于大多数患者在从头开始捕获22，也是一种常见的缺失，因此这表明基因组结构容易缺失。鉴定出大多数患者表现出的近端和远端YAC克隆，这些克隆含有含有公共缺失区域的树桩。从远端的Yac克隆制备了一个宇宙文库，转化为宇宙抗抑郁，并进行了详细的研究，例如FISH，PFGE和Southern分析。结果，发现在公共缺失区域的树桩附近存在22q11特异性重复序列，为200 kb。它们发出的信号是鱼类缺失的近端和远端。然而，通过PFGE和南部分析，由于该地区的重复和高多态性，很难识别缺失树桩。该区域包含独特的VNTR。该VNTR是一个27bp的重复，远端有两份约100份副本，每个YAC克隆中的近端有20份副本。包含这些VNTR的Cosmid克隆上的鱼表明，这些克隆最初位于相距约3 MB的情况下，由于缺失非常接近。关注VNTR的重新组合性质，它被认为是删除原因的可能候选者，我们正在促进对重组的过程进行分析。