制限酵素機能を有する人工修飾オリゴDNAの創出

具有限制性内切酶功能的人工修饰寡 DNA 的创建

• 批准号: 09273228
• 负责人: 早川 芳宏
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09273228/
• 关键词: DNAオリゴマー; アンチセンス核酸; ホスホロアミダイト法; DNAホスホロチオエ-ト

本年度は人工制限酵素やアンチセンス核酸など人工修飾核酸関連生体機能物質研究の基盤となるべき天然型および非天然型DNAオリゴマーの合成に関する研究を実施し、核酸塩基部無保護アミダイト法による長鎖DNAの高効率液相および固相合成法を開発した。固相合成法による調査オリゴDNA合成を例に述べる。原料として4種類の塩基部無保護デオキシリボヌクレオシドホスホロアミダイトを、ホスホロアミダイトの活性化剤として新規に開発したイミダゾリウムトリフラートを用い、固相法により、DNA60量体、5'(TATGGGCCTTTTGATAGGATGCTCACCGAGCAAAACCAAGAACAACCAGGAGATTTTATT)3'、を合成した。トリチル発色法により求めた合成収率は、1塩基鎖伸長平均>99.9%、通算99%であった。また単離収率は78%であった。本塩基部無保護法による合成粗生成物のHPLC分析によると、その純度はかつて本研究者が開発し、現在高純度DNA合成法としては最高の評価を受けている塩基部アリル保護合成法によって得られた粗生成物の純度に比べてまったく遜色のないものであった。本研究の最終目的である人工制限酵素やアンチセンス核酸にはインターヌクレオチド結合部をリン酸トリエステルやアルキルホスホン酸ジエステルあるいはホスホロチオエ-トのような塩基に対して不安定な基で修飾する必要があり、ヌクレオシド塩基部を強塩基処理によって除去するアシル系保護基を用いる既存のアミダイト法ではその合成は不可能である。塩基部の保護を必要としない本法は上記人工修飾機能性核酸関連化合物の合成にきわめて有用な方法と、今後の発展が期待される。

This year, artificial restriction enzymes have been used in the study of nucleic acid biosynthesis. This year, artificial restriction enzymes have been used in the study of nucleic acid biosynthesis. This year, artificial restriction enzymes have been used in the study of nucleic acid biosynthesis. This year, artificial restriction enzymes have been used in the study of nucleic acid biosynthesis. This year, artificial restriction enzymes have been used to modify nucleic acid biosynthesis. This year, artificial restriction enzymes have been used in the study of nucleic acid biosynthesis. This year, artificial restriction enzymes have been used to study the synthesis of nucleic acid biosynthesis. This year, artificial restriction enzymes have been used to study the synthesis of nucleic acid biosynthesis. This year, artificial restriction enzymes have been used to modify nucleic acid biosynthesis. This year, artificial restriction enzymes have been used to modify nucleic acid biomechanics. The synthesis of natural and non-natural DNA has been studied. Nucleic acid The solid phase synthesis method was used to synthesize DNA. The basic part of the raw material system is to protect the quality of raw materials, such as raw materials, materials, In this paper, we use the color method to calculate the synthetic rate, 1-base elongation average-gt;99.9%, and calculate 99% of the total yield. The rate is 78%. At the base of this paper, there is no guaranteed method to synthesize crude products for HPLC analysis. in this study, the high-temperature DNA synthesis method is currently the most sensitive to the protection of the base temperature of the synthesis method. The raw products are more effective than the traditional methods. The purpose of this study is to determine the feasibility of artificial enzyme restriction enzymes, nucleic acid restriction, and so on. In the base of the system, it is impossible to use the existing method to improve the performance of the system. Basic protection is necessary. In this method, artificial modification of functional nucleic acid compounds has been developed, and the synthesis of functional nucleic acid compounds is very useful.

项目成果

Y.Hayakawa: "Preparation of Short Oligonucleotides via the Phosphoramidite Method Using a Tetrazole Promoter in a Catalytic Manner" J.Am.Chem.Soc.119(49). 11758-11762 (1997)

Y.Hayakawa：“以催化方式使用四唑启动子通过亚磷酰胺法制备短寡核苷酸”J.Am.Chem.Soc.119(49)。

M.Hirose: "Preparation of(R)-(-)2-Methoxy-2'-(1H-teyrazol-5-yl)-1,1'-binaphthyl and(1R,2R)-(+)-1-Trimethylsilyl-2-(1H-tetrazol-5-yl)ferrocene" Synlett. 1997(5). 495-497 (1997)

M.Hirose：“(R)-(-)2-甲氧基-2-(1H-四唑-5-基)-1,1-联萘基和(1R,2R)-( )-1-三甲基甲硅烷基的制备

M.Kataoka: "Imidazolium Triflate as an Efficient Promoter for O-Selective Phosphitylation of N-Unprotected Nucleosides via the Phosphoramidite Approach" Nucleic Acids Symp Ser.37. 21-22 (1997)

M.Kataoka：“咪唑鎓三氟甲磺酸盐作为通过亚磷酰胺方法对 N-未保护核苷进行 O-选择性磷酸化的有效启动子”核酸 Symp Ser.37。

Y.Hayakawa: "Electrochemical Removal of Allylic Protecting Group in Nucleotide Synthesis" Nucleosides Nucleotides. (印刷中).

Y. Hayakawa：“核苷酸合成中烯丙基保护基的电化学去除”核苷核苷酸（正在出版）。

Y.Hayakawa: "A Facile Solid-Phase Synthesis of Oligodeoxyribonucleotides via the Phosphoramidite without Nucleoside-Base Protection" J.Am.Chem.Soc.(印刷中).

Y.Hayakawa：“通过无核苷碱基保护的亚磷酰胺轻松固相合成寡脱氧核糖核苷酸”J.Am.Chem.Soc。