核内レセプターの高次機能の解析

核受体高阶功能分析

• 批准号: 09277207
• 负责人: 加藤 茂明
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09277207/
• 关键词: 標的組換えマウス; 脂溶性ビタミンレセプター; ビタミンD標的遺伝子; リガンド結合; mammalian two-hybrid法; 共役転写因子; yeast two-hybrid法

本研究では以下の4点に焦点を当て、核内レセプターの高次機能を明らかにする目的で標的組換えマウスを用い解析を行った。また核内レセプターの細胞核内での機能を明確にする目的で、核内レセプターのリガンド結合による構造変化の解析、及びこの変化を認識する共役因子の同定を行なった。1)脂溶性ビタミンレセプターの高次機能の解析:脂溶性ビタミンDレセプター(VDR)は1種、ビタミンAには6種のレセプター(RARa,b,g及びRXRa,b,g)が存在する。VDRはホモ2量体もしくはRXRa,b,gのいずれかとヘテロ2量体を形成し、ビタミンD標的遺伝子の転写を制御する。このVDR KOマウスは授乳期以降にのみ障害を示すことが明らかになった他、性生殖系に障害がみられ、全く予期されなかった表現型がみられ更に解析を進めた。2)核内レセプターのリガンド結合による構造変化:核内レセプターはリガンド結合により転写促進能を得るが、この際レセプターの立体構造変化を伴うと考えられている。特にレセプターN末端とC末端に存在する2箇所の転写促進領域はリガンド結合依存的な機能上の相互作用が予想されている。そこでERのAF-1、AF-2の相互作用をyeast、mammalian two-hybrid法にて検討し、さらに相互作用する領域を同定した。3)核内レセプターの共役転写因子の検索:ER、VDR、アンドロゲンレセプター(AR)、ミネラルコルチコイド(MR)のAF-1、AF-2をプローブに、yeast two-hybrid法にて各種cDNAライブラリーから共役因子を検索した。特にER、ARのAF-1蛋白を細胞内で大量発現させ、結合する核内因子を生化学的に精製した。4)細胞周期と核内レセプター機能との相関:ER及びARの、AF-1とAF-2への細胞周期特異的なキナーゼ(サイクリン/CDK等)によるリン酸化の可能性を探った。

This study focuses on the following four aspects: the analysis of core functions, the analysis of target components, and the analysis of core functions. To clarify the function of the nucleus of the nucleus, to analyze the structural transformation of the nucleus, and to understand the identity of the co-operating factors 1)Analysis of the higher-order functions of fat-soluble protein profile: fat-soluble protein D profile (VDR) exists in one type, protein A in six types (RARa,b,g and RXRa,b,g). VDR is a 2-dimensional object, and RXRa,b,g is a 2-dimensional object. The VDR gene expression pattern is characterized by the presence of a negative gene in the lactation cycle and the presence of a negative gene in the reproductive cycle. 2)The structural transformation of the core structure: the core structure of the core structure. In particular, there are two different writing promotion domains at the N and C termini of the site, and the functional interaction between them is expected. The interaction between AF-1 and AF-2 in ER was studied by mammalian two-hybrid method. 3)The identification of co-operating factors in nuclear DNA:ER, VDR, AR, MR, AF-1, AF-2, yeast-two hybrid method. In particular, ER, AR and AF-1 proteins are produced in large quantities in cells, bound to nuclear factors and purified biochemically. 4)Correlations between cell cycle and nuclear function:ER and AR, AF-1 and AF-2, and the possibility of cell cycle-specific acidification.

项目成果

Yoshizawa,T., Kato,S., et al.: "Impaired bone formation and uterine hypoplasia with growth retardation after weaning in mice lacking the vitamin D receptor." Nature Genetics. 16. 391-396 (1997)

Yoshizawa,T.、Kato,S. 等人：“缺乏维生素 D 受体的小鼠断奶后骨形成受损、子宫发育不全并伴有生长迟缓。”

加 藤 茂 明: "内分泌・代謝疾患(別冊・医学のあゆみ):ステロイド受容体スーパーファミリー" 医歯薬出版株式会社, 566 (1997)

加藤茂晃：《内分泌与代谢疾病（另册/医学史）：类固醇受体超家族》石药出版有限公司，566（1997）

加 藤 茂 明: "炎症と抗炎症戦略:ステロイド薬・基礎" 医薬ジャーナル社, 831 (1997)

Shigeru Akira Kato：“炎症和抗炎策略：类固醇药物和基础知识”Iyaku Journalsha，831 (1997)

Takeyama,K., Kato,S., et al.: "25-Hydroxyvitamin D_3 1α-hydroxylase and vitamin D synthesis." Science. 277. 1827-1830 (1997)

Takeyama, K.、Kato, S. 等人：“25-羟基维生素 D_3 1α-羟化酶和维生素 D 合成。科学”277。1827-1830 (1997)

Kitanaka,S., Kato,S., et al.: "A new compound heterozygous mutation in the 11β-hydroxysteroid dehydrogenase type 2 gene in a case of apparent mineralocorticoid excess." J.Clin.Endocrinol.Metab.82. 4054-4058 (1997)

Kitanaka,S.、Kato,S. 等人：“在盐皮质激素明显过量的情况下，11β-羟基类固醇脱氢酶 2 型基因出现新的复合杂合突变。”J.Clin.Endocrinol.Metab.82-。 4058 (1997)