ステロイドホルモンによるmRNA安定化制御の解明

阐明类固醇激素对 mRNA 稳定性的控制

• 批准号: 09278207
• 负责人: 加藤 茂明
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09278207/
• 关键词: mRNA安定化制御; AUUUA配列結合タンパク; β-globin遺伝子; ノザンブロット; Two-hybridシステム; AUF2 結合因子; ステロイドホルモン

現在のところmRNA分解制御の分子メカニズム自体が不明な点が多く、その制御メカニズムを明らかにすることはステロイドホルモン依存的mRNA安定化(不安定化)制御機構解明に向けて必須の課題である。そこで本年度は特に以下の3点に焦点を当て検討した。1)AUUUA配列結合タンパクの機能解析:新規AUUUA配列結合因子(AUF2)のmRNA分解における役割をin vitro mRNA分解活性測定系に導入し検討した。本システムの概要は血清刺激プロモーターに繋いだレポーター遺伝子(β-globin遺伝子)をNIH3T3細胞に導入し、血清刺激により遺伝子産物を一過的に誘導した後、そのmRNAの残存量をノザンブロットにて測定することにより半減期を算出した。2)AUUUA配列結合タンパク共役因子群の検索:AUUUA 配列上に形成される複合体の構成因子を明らかにする目的で酵母を用いたTwo-hybridシステムを導入し、AUF2をbaitにしてヒト脳由来cDNAライブラリーからTwo-hybridスクリーニングによりAUF2とタンパク-タンパク相互作用する共役因子を検索した。3)AUUUA配列結合タンパク共約因子の機能解析:(2)のTwo-hybridスクリーニングによって得られたAUF2結合因子をコードするcDNA断片を用い、ヒト脳由来 cDNAライブラリーから全長cDNAを取得した。得られた全長cDNAを(1)のin vitro mRNA分解活性測定系に導入し、因子の存在下あるいは非存在下においてレポーターmRNAの半減期を測定することによりmRNA分解制御に対するその因子の関与を検討した。更に因子の存在下においてステロイドホルモン存在下および非存在下でも同様にレポーターmRNAの半減期を測定し、ステロイドホルモンの影響も併せて検討した。

Now の と こ ろ mRNA decomposition suppression の molecular メ カ ニ ズ ム autologous が unknown な point が く, そ の suppression メ カ ニ ズ ム を Ming ら か に す る こ と は ス テ ロ イ ド ホ ル モ ン dependent mRNA stabilization (unstable) suppression agencies interpret に to け て must の subject で あ る. Youdaoplaceholder0 て検 で で this year で particularly に the following <s:1> three に focuses を when て検 discuss て検 た. 1) Function analysis of AUUUA ligation-binding タ パ <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> : New regulation AUUUA ligation-binding factor (AUF2) <s:1> mRNA decomposition における division をin vitro mRNA decomposition activity determination is に introduction 検 discussion of 検 た. Summary this シ ス テ ム の は serum stimulus プ ロ モ ー タ ー に 繋 い だ レ ポ ー タ ー heritage 伝 child (beta globin heritage 伝) を に import し NIH3T3 cells, serum stimulus に よ り heritage 伝 zi chan content after を に induced し た, そ の mRNA の residual stock を ノ ザ ン ブ ロ ッ ト に て determination す る こ と に よ り half life を calculate し た. 2) The combination of AUUUA binds to the タ, パ, and パ co-active factor group <s:1> 検 :AUUUA Composite column worthy に form さ れ る の constitute factor を Ming ら か に す aim る で yeast を い た Two - hybrid シ ス テ ム を import し, AUF2 を bait に し て ヒ ト 脳 origin cDNA ラ イ ブ ラ リ ー か ら Two - hybrid ス ク リ ー ニ ン グ に よ り AUF2 と タ ン パ ク - タ ン パ ク す interaction Youdaoplaceholder0 Co-working factor を検 somalia た. 3) AUUUA arrangement combining タ ン パ ク roughly factor の function: (2) の Two - hybrid ス ク リ ー ニ ン グ に よ っ て have ら れ た AUF2 combination factor を コ ー ド す る cDNA fragment を い, ヒ ト 脳 origin cDNA ラ イ ブ ラ リ ー か ら full-length cDNA を obtain し た. Have ら れ た full-length cDNA を の (1) the in vitro mRNA の factoring activity determination に import し, presence of あ る い は the presence of に お い て レ ポ ー タ ー mRNA の half life を determination す る こ と に よ り mRNA decomposition suppression に す seaborne る そ の factor の masato and を beg し 検 た. The presence of more に factor の に お い て ス テ ロ イ ド ホ ル モ ン presence お よ び the presence of で も with others に レ ポ ー タ ー mRNA の half life を し, ス テ ロ イ ド ホ ル モ ン の も and せ て beg し 検 た.

项目成果

Yoshizawa,T., Kato,S., et al.: "Impaired bone formation and uterine hypoplasia with growth retardation after weaning in mice lacking the vitamin D receptor." Nature Genetics. 16. 391-396 (1997)

Yoshizawa,T.、Kato,S. 等人：“缺乏维生素 D 受体的小鼠断奶后骨形成受损、子宫发育不全并伴有生长迟缓。”

加 藤 茂 明: "内分泌・代謝疾患(別冊・医学のあゆみ):ステロイド受容体スーパーファミリー" 医歯薬出版株式会社, 566 (1997)

加藤茂晃：《内分泌与代谢疾病（另册/医学史）：类固醇受体超家族》石药出版有限公司，566（1997）

加 藤 茂 明: "炎症と抗炎症戦略:ステロイド薬・基礎" 医薬ジャーナル社, 831 (1997)

Shigeru Akira Kato：“炎症和抗炎策略：类固醇药物和基础知识”Iyaku Journalsha，831 (1997)

Takeyama,K., Kato,S., et al.: "25-Hydroxyvitamin D_3 1α-hydroxylase and vitamin D synthesis." Science. 277. 1827-1830 (1997)

Takeyama, K.、Kato, S. 等人：“25-羟基维生素 D_3 1α-羟化酶和维生素 D 合成。科学”277。1827-1830 (1997)

Kitanaka,S., Kato,S., et al.: "A new compound heterozygous mutation in the 11β-hydroxysteroid dehydrogenase type 2 gene in a case of apparent mineralocorticoid excess." J.Clin.Endocrinol.Metab.82. 4054-4058 (1997)

Kitanaka,S.、Kato,S. 等人：“在盐皮质激素明显过量的情况下，11β-羟基类固醇脱氢酶 2 型基因出现新的复合杂合突变。”J.Clin.Endocrinol.Metab.82-。 4058 (1997)