BDNFとNT-3遺伝子間のカルシウム依存的な対立的転写制御機構の解明

阐明 BDNF 和 NT-3 基因之间的钙依赖性等位基因转录控制机制

• 批准号: 09277219
• 负责人: 津田 正明
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Toyama Medical and Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09277219/
• 关键词: ニューロン; カルシウム; BDNF; NT-3; c-fos; 転写

本年度は、主にラット大脳皮質神経細胞の初代培養系を用いて、リン酸カルシウム法によるDNAトランスフェクション系の基礎検討と、BDNF遺伝子のカルシウムシグナル依存的な発現制御系及びプロモーター解析を重点的に行った。1.ニューロン特異的な発現ベクター作製の試み: 初代培養系にはグリア細胞が混在し、それによってDNAはよく貧食される。そこで、ニューロンだけで発現が可能な発現ベクターの構築を、サイレンサーを用いて行った。その結果、プロモーターの種類によってサイレンサーだけではニューロン特異性を出せないことが明らかとなった。2.BDNF遺伝子のプロモーター解析: 5′欠失遺伝子を構築しルシフェラーゼ遺伝子をレポーターとしてトランスフェクションを行った結果、-200bp下流領域にカルシウム応答性エレメントの存在することが明らかとなった。また、大脳皮質ニューロンでも、BDNF/NT-3遺伝子間における対立的発現制御が認められるか否かについて、現在検討中である。3.BDNF遺伝子の発現制御系の解析: カルシウムシグナルによるBDNF遺伝子の活性化には、最適な細胞内カルシウム濃度のあることが明らかとなった。また、電位依存性カルシウムチャネルとNMDAレセプターから流入するカルシウムは、BDNFとc-fos遺伝子発現に異なったルートを介して制御を行うことが明らかとなった。

は this year, the main に ラ ッ ト big god 経 脳 cortex cells の を original training department with い て, リ ン acid カ ル シ ウ ム method に よ る DNA ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン beg と based 検 の, traces of BDNF 伝 son の カ ル シ ウ ム シ グ ナ ル dependent な 発 now suppression and び プ ロ モ ー タ ー analytical を key line に っ た. 1. ニ ュ ー ロ ン specific な 発 now ベ ク タ ー cropping の try み : original training department に は グ リ ア cells が mix in し, そ れ に よ っ て DNA は よ く poor food さ れ る. そ こ で, ニ ュ ー ロ ン だ け で 発 が may now な 発 now ベ ク タ ー の constructing を, サ イ レ ン サ ー を with い て line っ た. そ の results, プ ロ モ ー タ ー の kinds に よ っ て サ イ レ ン サ ー だ け で は ニ ュ ー ロ ン specificity を out せ な い こ と が Ming ら か と な っ た. 2. Traces of BDNF 伝 son の プ ロ モ ー タ ー analytic: 5 'owe lost posthumous son 伝 を build し ル シ フ ェ ラ ー ゼ posthumous son 伝 を レ ポ ー タ ー と し て ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン を line っ た results, - 200 bp mean field に カ ル シ ウ ム 応 a sexual エ レ メ ン ト の is す る こ と が Ming ら か と な っ た. ま た, big 脳 cortex ニ ュ ー ロ ン で も, BDNF/NT - 3 survived 伝 between に お け る of seaborne 発 now suppression が recognize め ら れ る か no か に つ い て, now 検 please で あ る. 3. Traces of BDNF 伝 son の 発 now suppression is の analytic: カ ル シ ウ ム シ グ ナ ル に よ る BDNF heritage 伝 son の activeness に は, optimum な intracellular カ ル シ ウ ム concentration の あ る こ と が Ming ら か と な っ た. ま た, potential dependency カ ル シ ウ ム チ ャ ネ ル と NMDA レ セ プ タ ー か ら inflows す る カ ル シ ウ ム は, BDNF と c fos heritage 伝 son 発 different showing に な っ た ル ー ト を interface し て suppression を line う こ と が Ming ら か と な っ た.

项目成果

Ogawa,W.: "Isolation and characterization of an Esherichia coli mutant kacking the mojor serine transporter and cloning of a serine transporter" J.Biochem.122. 1241-1246 (1997)

小川，W.：“攻击主要丝氨酸转运蛋白的大肠杆菌突变体的分离和表征以及丝氨酸转运蛋白的克隆”J.Biochem.122。

Inaba,K.: "Na+(Li+)/H+ antiporter in Pseudomonas Aeruginosa and effect of Li+ on cell growth" Biol.Pharm.Bull.20. 621-624 (1997)

Inaba,K.：“铜绿假单胞菌中的 Na (Li )/H 逆向转运蛋白以及 Li 对细胞生长的影响”Biol.Pharm.Bull.20。

Imaoka,T.: "In vivo gene transfer into the adult mammalian central nervous system by continuous injection of plasmid DNA-cationic liposome complex" Brain Res.780. 119-128 (1998)

Imaoka,T.：“通过连续注射质粒 DNA-阳离子脂质体复合物将基因转移到成年哺乳动物中枢神经系统中”Brain Res.780。

津田正明: "神経活動と遺伝子発現" 蛋白質核酸酵素. 42. 102-112 (1997)

Masaaki Tsuda：“神经活动和基因表达”蛋白质核酸酶。42. 102-112 (1997)

Ichikawa,D.: "Attenuation of cell death mediated by membrane depolarization different from that by exogenous BDNF in cultured mouse cerebellar qranule cells" Mol.Brain Res.(印刷中). (1998)

Ichikawa, D.：“培养的小鼠小脑 Qranule 细胞中膜去极化介导的细胞死亡减弱与外源 BDNF 介导的减弱”（Mol.Brain Res）（1998 年出版）。