カルシウム依存的なBDNF/NT-3遺伝子間の転写活性化・不活性化機構の解析

BDNF/NT-3基因钙依赖性转录激活/失活机制分析

• 批准号: 12028212
• 负责人: 津田 正明
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Toyama Medical and Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12028212/
• 关键词: ニューロン; カルシウム; BDNF; NT-3; プロモーター; PACAP; ニューロトロフィン

本年度は、脳由来因子(BDNF)、ニューロトロフィン-3(NT-3)、PACAP(pituitary adenylate cyclase activating polypeptide)遺伝子のカルシウム(Ca^<2+>)シグナル応答に関わるプロモーター解析を、ラット大脳皮質初代神経細胞培養系を用いて重点的に行った。1.BDNF遺伝子プロモーター(BDNF-P)の解析(1)BDNF-PIと-PIIIのCa^<2+>シグナルへの異なった応答性について:電位依存性L-型カルシウムチャネル(L-VDCC)とNMDAレセプター(NMDA-R)からのCa^<2+>流入に対して、BDNF-PIはL-VDCCからのCa^<2+>流入に対してだけ応答したが、BDNF-PIIIはNMDA-R由来のCa^<2+>流入にも弱いながら応答した。(2)BDNF-PiのCa^<2+>応答エレメントの検索:BDNF-PIの部分欠失、変異型プロモーターを作製してCa^<2+>応答性を調べた所、-80〜-90の存在するCREが応答性に強く関わっていることが明らかとなった。また、CREBが少なくとも部分的にCa^<2+>応答性に関わっていることが明らかとなった。2.NT-3遺伝子プロモーター(NT-3-PIB)の解析種々の欠失、変異型プロモーターを作製してCa^<2+>シグナル応答性を調べた所、-100付近に存在するGC-boxが基本的な転写活性の制御に大きく効いていることが明らかとなった。Ca^<2+>シグナル応答エレメントは不明のままである。3.PACAP遺伝子プロモーター(PACAP-P1Aの解析PACAP-P1Aの-200付近のCREを含む領域と、exon1Aより下流の領域がPACAP-PIAの基本転写開始に強く関わっていることが明らかとなった。

今年，与脑源性因子（BDNF），神经营养蛋白3（NT-3）和PACAP（垂体腺苷酸环化酶激活多肽）基因的钙（CA^<2+>）信号反应有关的启动子分析专注于使用鼠脑脑皮质的主要神经元培养系统。 1. Analysis of the BDNF gene promoter (BDNF-P) (1) Differential responses to Ca^<2+> signals of BDNF-PI and -PIII: BDNF-PI responded only to Ca^<2+> influx from voltage-dependent L-type calcium channel (L-VDCC) and NMDA receptor (NMDA-R), while BDNF-PIII responded to ca^<2+>从L-VDCC涌入，尽管它很弱。 （2）搜索BDNF -PI的CA^<2+>响应元素：当我们通过造成BDNF -PI和突变体启动子的部分缺失来研究Ca^<2+>响应性时，揭示了存在-80至-90的CRES的CRES非常涉及响应能力。还揭示了Creb至少部分参与了Ca^<2+>响应能力。 2。在各种缺失和突变启动子准备检查Ca^<2+>信号响应能力后，对NT-3基因启动子（NT-3-PIB）的分析，据显示，位于-100附近的GC-box在控制基本的转录活性方面非常有效。 CA^<2+>信号响应元件仍然未知。 3。对PACAP基因启动子（PACAP-P1A）的分析已表明，PACAP-P1A的-200接近-200和Exon1a下游区域的含CRE区域强烈参与PACAP-PIA的基础转录的启动。

项目成果

Tabuchi,A.: "Novel splice variants of PACAP gene in mouse cerebellar granule cells."Neuroreport. (印刷中). (2001)

Tabuchi, A.：“小鼠小脑颗粒细胞中 PACAP 基因的新型剪接变体。”Neuroreport（出版中）。

Tabuchi,A.: "Involvement of endogenous PACAP expression in the activity-dependent survival of mouse cerebellar granule cells."Neurosci.Res.. 39. 85-93 (2001)

Tabuchi,A.：“内源性 PACAP 表达参与小鼠小脑颗粒细胞活性依赖性存活。”Neurosci.Res.. 39. 85-93 (2001)

Imamura,L.: "Repression of activity-dependent c-fos and brain-derived neurotrophic factor mRNA ssion by pyrethroid insecticides accompanying a decrease in Ca^<2+> influx into neurons"J.Pharm.Exp.Ther.. 295. 1175-1182 (2000)

Imamura,L.：“拟除虫菊酯杀虫剂对活性依赖性 c-fos 和脑源性神经营养因子 mRNA 的抑制，伴随着 Ca^2 流入神经元的减少”J.Pharm.Exp.Ther.. 295. 1175