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P300/CBPを介するコアクチベータ-ネットワークと胚性細胞の分化誘導

P300/CBP介导的共激活子网络和胚胎细胞分化诱导

基本信息

批准号：
09277226
负责人：
横山一成
金额：
$ 1.41万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09277226/
关键词：
p300 ATF-2 DRF PKCα Differentiation RA Ad-Ela

项目摘要

アデノウイルスE1A蛋白質及びレチノイン酸(RA)による胚性腫瘍細胞F9の分化誘導機構を解析する目的で、発癌遺伝子c-junのトランス活性化機構に焦点をあて研究をすすめている。c-junの強制発現はF9細胞を間葉細胞に分化誘導させる事により、c-junのトランス活性化に必要なエレメントDRE(Differentiation Response Element)をc-junプロモーターの-190〜-46に見いだし、これに結合する核内因子DRF(Differentiation Response factor)-1,-2を同定した。E1A及びRAによる分化に伴いDRF-2は消失し、DRF-1は移動度が少し遅いDRF-1'となる。E1Aのドメイン消失変異株、ゲルシフト、プロモーター活性の解析によりDRFは分化に伴いリン酸化される事を見いだした(EMBO.J.14.3496-3509,1995)。本年度は、このDRF複合体にアデノウイルスE1A結合蛋白質でコアクチベータ-であるp300及びATF-2転写因子が含まれる事を初めて明らかにした。相互の免疫沈降反応、Tag付発現ベクターによる相互の免疫反応、in vitroにおけるGST-pull downアッセイや、バキュロウイルス蛋白質を使用した解析によりp300のBr-C/H2ドメイン(963-1571a.a)とATF-2の(112-350a.a)のドメインが直接会合する事、及びATF-2の121のSerineのPKCαによるリン酸化がATF-2/p300によるトランス活性化には必要である事を証明した(Genes & Dev.12,233-245,1998)。今後はp300,ATF-2以外の第三の分子の同定が急務である。その他、p300とCBPの分化誘導、G1アレスト、アポトーシスの機能分担をリボザイムやアンチセンス法を用いて解析を進めている。

Objective: to analyze the differentiation mechanism of E1A protein and RA, the differentiation mechanism of embryogenic cell F9, and to analyze the purpose of differentiation, the activation mechanism of c-jun gene and the focus of research on the activation of cancer cells. C-jun forced the differentiation of F9 cells to induce cell differentiation, and c-jun cells were activated. Dre (Differentiation Response Element), c-jun cells (Dre), c-jun cells (190) were used in combination with the nuclear factor DRF (Differentiation Response factor)-1. The differentiation of E1A and RA was accompanied by the disappearance of DRF-2 and the mobility of DRF-1. Analysis of the activity of DRF differentiation and acidification (EMBO.J.14.3496-3509). This year, the DRF complex, protein E1A, protein, protein Immunize against each other, and Tag pay each other to immunize against each other, in vitro, GST-pull down, protein, Br-C/H2, p300, ATF-2, 350a.a, and so on. And ATF-2 121g Serine PKC α, acidification, ATF-2/p300 activation, activation and activation (Genes & Dev.12233-245, 1998). In the future, the third party in addition to ATF muri 2 will agree on the same urgent business. The other, the p300 CBP differentiation guide, the G1 protocol, and the sharing mechanism were used to analyze the performance of the system.