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真正細菌SRP RNAの機能ドメイン解析

真细菌SRP RNA的功能域分析

基本信息

批准号：
09278202
负责人：
中村幸治
金额：
$ 1.54万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

哺乳類のシグナル認識粒子(SRP)は、SRP RNAと6種類の蛋白質から構成される。SRP RNAは機能上、4ドメイン(I〜IV)からなる。大腸菌4.5S RNAは114残基で、哺乳類SRP RNAのドメインIV及びIIの一部に相当し、生体内ではSRP構成成分のFfhと蛋白質膜透過に関与する一方、蛋白質合成伸長因子EF-Gとも結合能を有し、蛋白質合成にも関与する多機能分子である。本研究では、4.5S RNAの両過程における必須機能ドメインについて解析を行うため、種々の変異を導入した4.5S RNAについて、大腸菌4.5S RNA条件欠損株S1192株における成育回復活性及び蛋白質結合活性について解析を行った。真正細菌SRP RNA間でよく保存されている22残基(+43〜+65)を含むドメインIV領域への変異ではいずれも成育回復活性、蛋白質結合活性はともに減少したが、特に、A47,G48,G49,A60,C62,A67への変異では機能低下は著しく、両蛋白質への結合能は野生型の10%以下であった。これら6残基は2次構造上、バルジ構造を形成していると推測されたが、このバルジ構造を欠失させた変異体では、機能は完全に失っており、蛋白質との結合能も消失していた。一方、末端22残基(+43〜+65)のみから構成される変異体は、野生型の約60%の回復活性を有していた。以上の結果から、Ffh及びEF-Gはともに4.5S RNA上の高度に保存された領域中に存在するバルジ構造を認識し4.5S RNAに結合すること、また、4.5S RNA機能には蛋白質の結合が必要であるが、2つの4.5S RNA結合蛋白質は独立に4.5S RNAと結合し機能していることが示された。

Mammalian recognition particles (SRP) and SRP RNA are composed of 6 types of proteins. SRP RNA is functional, 4ドメイン(I~IV)からなる. Coliform 4.5S RNA, 114 residues, mammalian SRP Parts of RNA's IV and II are equivalent, and Ffh, a component of SRP in vivo, and protein membrane permeability On the one hand, the protein synthesis elongation factor EF-G has binding energy, and on the other hand, the protein synthesis elongation factor EF-G has a multifunctional molecule. In this study, the process of 4.5S RNA must be analyzed and analyzed, and the different types of RNA must be introduced into 4.5S. RNA analysis, coliform 4.5S RNA condition-deficient strain S1192 strain, growth recovery activity and protein binding activity analysis and analysis. True Bacteria SRP The RNA intercontaining 22 residues (+43~+65) are preserved and the sterile IV domain is preserved, and the growth recovery activity and protein binding activity are reduced.したが, 特に, A47, G48, G49, A60, C62, A67 are different and have low function, and the protein binding capacity is less than 10% of the wild type. Based on the secondary structure of これら6 residue, the structure of バルジ is formed, and the structure of していると is speculated to be されたが and このバルジThe missing parts are missing, the function is completely lost, and the binding energy of proteins is lost. On the one hand, the terminal 22 residues (+43~+65) are used to form the allotype, and about 60% of the wild type has a restorative activity. The results of the above are that the high degree of preservation of RNA, Ffh and EF-G はともに4.5S exists in the field and the structure and structure of EF-G are recognized 4.5S RNA binding is necessary, 4.5S RNA function, protein binding is necessary, 2つの4.5S RNA binding protein is independent 4.5S The function of RNA binding is the same as that shown in the figure.