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真正細菌に存在する新機能を有する低分子RNAの同定と機能解析

真细菌中具有新功能的小RNA的鉴定和功能分析

基本信息

批准号：
12029202
负责人：
中村幸治
金额：
$ 1.28万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

真核生物および原核生物において、多種類の低分子RNAが存在し、重要な機能を有していることが明らかとなっている。特に、原核生物では、これらの低分子RNAが、転写、翻訳レベルで、遺伝子の発現制御に関わっている。ゲノム上の全遺伝子情報を解析し、機能面でのネットワークを解明する上で、低分子RNAの機能解析は重要である。本研究では、枯草菌において、全ての細胞内低分子RNAを網羅的に同定し、構造解析を行うことを目的とする。枯草菌の対数増殖期の菌体の全RNA中に10種類程度の低分子RNAの存在を確認した。ノーザン解析から、このうち、4種類は5S RNA、scRNA、tmRNA、M1 RNAであった。長さが200塩基付近の2本のバンドについて(BS190RNA、および、BS200RNA)、ゲル抽出後、3'末端へpoly(A)付加して作成したcDNAの塩基配列を決定した。aspS-yrvM遺伝子間のギャップ領域にコードされていた。両末端の解析から、BS200RNAから、5'末端の10塩基が切断され、BS190RNAとなることが示唆された。BS190RNA遺伝子の欠損変異株では、増殖能の低下が見られ、タンパク質合成も一部阻害されていた。一方、X6 Hisタグを付加したRNAポリメラーゼβサブユニットを発現する枯草菌から調製した菌体抽出液に対してNi-NTAカラムを用いたプルダウン実験により、BS190RNAは、特異的に、RNAポリメラーゼホロ酵素と結合する事が示唆された。今年度解析を重点的に行ったBS190RNA(前駆体は、BS200RNA)は、数種類のタンパク質の合成に転写レベルで関与すると予想された。BS190RNAに相同なRNAは他生物になかった。一方、ゲノム上の500塩基以上の100カ所のギャップ配列のノーザン解析の結果から、調べた50箇所のうち、20箇所について転写物の存在が確認できた。

Eukaryotic and prokaryotic organisms, many kinds of low molecular RNA exist, and important functions exist. In particular, prokaryotes are involved in the development of low molecular RNA, transcription, translation, and gene expression. It is important to analyze the complete gene information on the RNA and the function of the RNA. The purpose of this study is to determine the presence of Bacillus subtilis, capture all intracellular low-molecular RNA, and analyze its structure. The presence of 10 species of low molecular RNA in total RNA of Bacillus subtilis during its growth period was confirmed. 4 kinds of 5S RNA, scRNA, tmRNA and M1 RNA The nucleotide sequence of the cDNA is determined by the addition of poly(A) at the 3'end of the cDNA after extraction and the addition of the nucleotide sequence at the 2-site near the 200-site (BS190 RNA, BS200 RNA). aspS-yrvM is the most popular language in the world. BS200 RNA, BS190 RNA, BS200 RNA, BS200 The BS190 RNA gene was found to be deficient in mutant plants, and its reproductive ability was reduced. The expression of BS190 RNA was detected in the culture medium of Bacillus subtilis extract, and the expression of BS190 RNA was detected in the culture medium of Bacillus subtilis extract. This year's analysis focuses on BS190 RNA(precursor, BS200 RNA) and several types of protein synthesis. BS190RNA is the same RNA as other organisms. One side, more than 500 base points on the list of 100 base points of the list of the list of the results of the analysis of the list, adjust the list of 50 base points, 20 base points of the list of the existence of the list of things confirmed.