ゲノム工学に基づく内分泌撹乱化学物質高精度モニタリングシステムの確立

基于基因组工程的内分泌干扰物高精度监测系统的建立

• 批准号: 13027209
• 负责人: 中村 幸治
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13027209/
• 关键词: 腸管上皮細胞; 内分泌攪乱化学物質; アルキルフェノール; タイト・ジャンクション; アポトーシス; エストロジェン; バリアー機能; リン酸化

アルキルフェノール類は工業用に汎用されている非イオン界面活性剤アルキルフェノールポリエトキシレートの分解物で、下水を通じて広く水環境中に放出されておりエストロジェン活性が報告されている。食物及び飲料水由来内分泌撹乱化学物質のモニタリングシステムの構築に向けての基礎的知見を得るため、ヒト腸管上皮細胞を用いて、P-アルキルフェノール(C2〜C9)が腸管バリアー機能や細胞内情報伝達に及ぼす影響を調べた。ヒト腸管上皮細胞Caco-2のバリアー機能は、コラーゲンコート0.4μmメンブレン上に単層培養し、Tight Junction作成後、経上皮電気抵抗値(TEER)により測定した。アポトーシスの誘導は、電気泳動法によるDNAのラダーの検出及び培地中遊離乳酸脱水素酵素(LDH)の測定により検出した。エストロジェン受容体たんぱく質p70ERの発現と、焦点接着キナーゼたんぱく質p125FAKの発現及びリン酸化は免疫沈降ウエスタンブロット法にて解析した。プロテオーム解析は2次元電気泳動法により行い、発現たんぱく質の変化及び誘導を調べた。その結果、C7,C8,C9フェノール(0.01μM)はTEER値を有意に低下させた。また、30分以内のC9フェノール処理においてはTEER値減少の閾値は約5μMであることが判明した。C9フェノール(5μM)処理において、細胞接着に関与する焦点接着キナーゼたんぱく質p125FAKは、リン酸化が抑制された。Caco-2細胞を各P-アルキルフェノール(0.01μM)で60分間処理後、アルキルフェノール除去培地で12時間培養した結果、C5〜C9フェノール処理においてDNAのラダーが検出され、LDH量も経時的に上昇したことから、C5〜C9フェノールは細胞膜障害作用によりアポトーシスを誘導したと考えられた。エストロジェン受容体との結合が報告されているC9フェノール(10μM)は、Caco-2細胞において、エストロジェン受容体P70ERの発現を経時的に誘導した。

For industrial applications, the non-aqueous interface activity is reported in the decomposition products of the aqueous environment, and in the release of the non-aqueous interface activity in the aqueous environment. Food and drink, water, endocrine disruptors, chemicals, basic knowledge of the construction of the intestinal tract, the use of intestinal epithelial cells, and the regulation of intestinal tract function and intracellular information transmission (C2 ~ C9). The function of Caco-2 cells was measured by measuring the TEER of the epithelial cells cultured in single layer on 0.4μm medium and Tight Junction. Detection of DNA and detection of LDH in culture by electrokinetic method The expression of p70ER in the receptor, the expression of p125FAK in the focus, and the analysis of p70 ER in the acidified immune sedimentation. The analysis of the two-dimensional electrokinetic method is carried out in the middle of the process, and the quality of the sky is changed and induced. C7,C8,C9 are found to be significantly lower than TEER values (0.01μM). The threshold value of TEER value reduction is about 5μM when C9 is processed within 30 minutes. C9-C9 (5μM) treatment was used to inhibit cell adhesion and cell adhesion. Caco-2 cells were treated for 60 minutes with P-4 (0.01μM) and then cultured for 12 hours. C5 ~ C9 cells were treated with P-4 (0.01μM) and then cultured for 12 hours. DNA detection and LDH production increased during treatment. C5 ~ C9 cells were treated with P-4 (0.01 μ M) and then induced by cell membrane barrier. The binding of receptor P70ER in Caco-2 cells was reported to be induced by C9 (10μM) and Caco-2 cells.

项目成果

Kakeshita, H.: "Effect of depletion of FtsY on spore morphology and the protein composition of the spore coat layer in Bacillus subtilis"FEMS Microbiol. Lett.. 195.1. 41-46 (2001)

Kakeshita, H.：“FtsY 耗尽对枯草芽孢杆菌孢子形态和孢子包衣层蛋白质组成的影响”FEMS Microbiol。

Nakamura, K.: "Minimal functional structure of Escherichia coli 4.5S RNA required for binding to elongation factor G"J. of Biol. Chem.. 276・25. 22844-22849 (2001)

Nakamura, K.：“结合延伸因子 G 所需的大肠杆菌 4.5S RNA 的最小功能结构”，《Biol Chem.》 276・25（2001 年）。

Ando, Y.: "Expression of a small RNA, BS203 RNA, from the yocl-yocJ intergenic region of Bacillus subtilis genome"FEMS Microbiol Lett.. (発表予定). (2002)

Ando, Y.：“来自枯草芽孢杆菌基因组的 yocl-yocJ 基因间区域的小 RNA BS203 RNA 的表达”FEMS Microbiol Lett..（待提交）。