ATM遺伝子異常による神経細胞死の機構解析

ATM基因异常导致神经细胞死亡的机制分析

• 批准号: 09280213
• 负责人: 江島 洋介
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09280213/
• 关键词: ATM; 突然変異; 神経細胞; A-T; 遺伝病

ヒト劣性遺伝病のアタキシア・テランジェクタシア(A-T)は、細胞レベルでは放射線高感受性と細胞周期チェックポイント欠損、臨床レベルでは小脳失調、免疫不全と高発がん性を特徴とし、神経症状はプルキンエ細胞の選択死が原因と推測され、神経細胞死の遺伝病モデルとなる。本研究ではA-Tの原因遺伝子ATMの遺伝子変異解析し、その特性を明らかにすることを目的とした。用いた試料は日本人A-T患者から樹立した線維芽細胞系で、8家系に属する患者10人とその両親6人の試料を解析した。66個のエクソンと3056ベースのオープンリーディングフレームをもつ大型ATM遺伝子上の変異を迅速に検出するため、制限酵素フィンガープリント法を用いた。細胞から調製したRNAを出発材料とし、逆転写PCR法で得たcDNAを制限酵素で数百ベース未満に消化後末端ラベル断片をアクリルアミドゲル上で解析した。cDNA断片解析後、直接シーケンスにより変異を同定した。全16アレルのうち12アレルにおいて総計6種類の変異を同定した。4例はエクソン欠失(エクソン7、16、33、35)、ほか2例はエクソン33上の1塩基欠失(4649delA)とエクソン55上の5塩基欠失(7883del5)であった。一例を除く5例は日本人特有の変異であった。エクソン33欠失と7883del5変異は高頻度で、全アレルの44%を占めハプロタイプ解析によって創始者効果型の変異であることがわかった。本研究により日本人A-T患者における変異特性を明らかにし、創始者型変異の同定は患者の遺伝子診断とヘテロ保因者同定のための基礎知見となると期待される。また本解析でも変異頻度の高かった遺伝子の5′側領域の機能解析のためこの領域のcDNAに交雑する配列を探索し、7番、9番及び10番染色体上に存在を確認し、その構造解析が進行中である。経費は細胞培養、遺伝子解析のための培養用消耗品と薬品、酵素を主とする遺伝子解析のための消耗品に用いた。

The disease is characterized by high sensitivity to radiation, cell cycle failure, clinical dysregulation, immune deficiency, high immunity, neurological symptoms, cell death, and presumed causes of death. This study aims to analyze the causes and characteristics of A-T gene transfer and ATM gene transfer. The samples were analyzed from 10 Japanese A-T patients and 6 relatives from 8 families. 66 different types of ATMs can be detected quickly and restricted by enzyme selection. Cell modulation RNA production materials, reverse transcription PCR method to obtain cDNA restriction enzymes, hundreds of samples, post-digestion terminal fragments, analysis After cDNA analysis, direct translation is performed. All 16 categories are different from each other. 4 cases of (7, 16, 33, 35), 2 cases of One case is unique to the Japanese. 33 missing 7883del5 different high frequency, total loss of 44% of the total loss of 44% This study aims to explore the differential characteristics of Japanese A-T patients, and to explore the basis of differential diagnosis, differential diagnosis, and differential diagnosis. Functional analysis of the 5′-side region of the high-frequency cDNA fragments in this analysis is in progress to explore the alignment of cDNA fragments on chromosomes 7, 9, and 10. Consumables for cell culture, gene analysis, enzymes, and gene analysis

项目成果

Ejima,Y.: "Mutations of the ATM gene detected in Japanese ataxia-telangiectasia patients : possible preponderance of the two founder mutations 4612del165 and 7883del5" Human Genetics. (印刷中). (1998)

Ejima, Y.：“在日本共济失调毛细血管扩张症患者中检测到的 ATM 基因突变：两个创始人突变 4612del165 和 7883del5 可能占优势”《人类遗传学》（1998 年出版）。

江島洋介: "末梢血管拡張性アタキシアの原因遺伝子と老化" 実験医学. 15・3. 226-230 (1997)

江岛洋介：“外周血管舒张性共济失调和衰老的致病基因”实验医学15・3（1997）。

Ejima,Y.: "Phenotypic correction of ataxia-telangiectasia cellular defect by exogenously introduced human or mouse subchromosomal fragments" Somatic Cell and Molecular Genetics. 23・5. 341-351 (1997)

Ejima，Y.：“通过外源引入的人或小鼠亚染色体片段对共济失调毛细血管扩张细胞缺陷进行表型校正”《体细胞和分子遗传学》23·5（1997）。

江島洋介: "放射線感受性とゲノム安定性に関係するヒト疾患遺伝子(ATM,BLM,WRN)" 実験医学. 15・16. 51-56 (1997)

江岛洋介：“与放射敏感性和基因组稳定性相关的人类疾病基因（ATM、BLM、WRN）”实验医学15・16（1997）。