温度感受性変異レトロウイルスを用いた造血幹細胞株の樹立と分子生物学解析

利用温度敏感突变型逆转录病毒建立造血干细胞系并进行分子生物学分析

• 批准号: 03252205
• 负责人: 杉山 治夫
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03252205/
• 关键词: Stem cell line; Abelsonマウス白血病ウイルス; Dexture culture

我々が分離したAbelsonマウス白血病ウイルスの温度感受性変異株(tsmutant)でトランスフォ-ムした未熟B細胞株では、許容温度(35℃)では、増殖するのみであるが、非許容温度(39℃)に培養温度を上げると、細胞が、transformedの状態から、untransformedの状態に変わり、このため分化が一斉にはじまり、まず1g遺伝子の再構成がおこり、次に、T細胞レセプタ-遺伝子の再構成も起こる。さらに細胞表面には、Thyー1抗原が一過性に出現したり、RA3ー6B2モノクロ-ナル抗体で検出されるB220抗原も、cyclicに発現した。このようなデ-タから、血球系細胞の分化研究に対する、Abelsonウイルスのts mutantの有用性が確立された。そこで、このts mutantを用いて、血球系のより未熟な細胞をトランスフォ-ムさせ、stem cell lineを樹立し、stem cellの分化を、培養温度でコントロ-ルし、その分化機構を解明しようとするのが本研究である。現時点での研究状況は次のようである。1.マウスの骨髄細胞からDexture cultureを作製した。一方、ts vーabl geneを挿入したpZip・neoーtsーvーabl retroviral vectorやLTRをMPSVにかえたvectorを作製した。これらのretroviral vectorを、Dexture cultureに感染させ、トランスフォ-ムし株細胞の樹立を試みているが、今のところ、stem cell lineの樹立には成功していない。2.上記のretroviral vectorを正常マウスの骨髄細胞に感染させ、致死的に放射線照射したマウスに骨髄移植を行ない、白血病化を試み、これから、stem cell line樹立を目ざしている。

I 々 が separation し た Abelson マ ウ ス leukemia ウ イ ル ス の temperature sensitivity - different strains (tsmutant) で ト ラ ン ス フ ォ - ム し た unripe B cell lines で は, allowable temperature (35 ℃) で す は, raised colonization る の み で あ る が (39 ℃), the allowable temperature に culture temperature on を げ る と, cell が, the transform Ed の state か ら and untransformed の state に - わ り, こ の た め differentiation が a 斉 に は じ ま り, ま ず 1 g heritage 伝 son の reconstitution が お こ り, times に, T cells レ セ プ タ constitute も again - but 伝 son の こ る. さ ら に cell surface に は, Thy ー 1 antigen が transient に appear し た り, RA3 ー 6 b2 モ ノ ク ロ - ナ ル antibody で 検 out さ れ る B220 antigen も, cyclic に 発 now し た. こ の よ う な デ - タ か ら, blood cells の research に す seaborne る, Abelson ウ イ ル ス の ts mutant の usefulness が establish さ れ た. そ こ で, こ の ts mutant を with い て, blood の よ り unripe な cells を ト ラ ン ス フ ォ - ム さ せ, stem cell line を し, stem cell differentiation を の, culture temperature で コ ン ト ロ - ル し, そ の differentiation institutions を interpret し よ う と す る の が this study で あ る. The current point で で research status で next ようである ようである. 1. Youdaoplaceholder0 ウス bone marrow cells らDexture cultureを preparation of <s:1> た. One party, the ts v <s:1> abl geneを inserted the <s:1> たpZip · neo <s:1> ts <s:1> v <s:1> abl たvector やLTRをMPSVに えた えたvectorを to create an た. こ れ ら の retroviral vector を, Dexture culture に infection さ せ, ト ラ ン ス フ ォ - ム し plant cells の set を try み て い る が, today の と こ ろ, stem cell line の set に は successful し て い な い. 2. Written の retroviral vector を normal マ ウ ス の cells in bone marrow に さ せ, lethal に radiation し た マ ウ ス に bone marrow transplant を line な い, leukemia を み, こ れ か ら, stem cell line set を mesh ざ し て い る.

项目成果

M.Nakagawa: "cDNA cloning of the murine 30ーkDa protein homologous to the 32ーkDa subunit of human replicatoin protein A" Nucleic Acid Research. 19. 4292 (1991)

M. Nakakawa：“与人复制蛋白 A 的 32 kDa 亚基同源的鼠 30 kDa 蛋白的 cDNA 克隆”《核酸研究》19. 4292 (1991)。

S.Tsukada: "Continuing Vγ_2 to Jγ_2 rearrangements of murine T cell receptor gamma genes in a Bーcommitted immature cell line" Molecular Immunology.

S. Tsukada：“在 B 定型未成熟细胞系中小鼠 T 细胞受体 γ 基因的持续 Vγ_2 到 Jγ_2 重排”分子免疫学。

Y.Minami: "Monoclonal antiーV_H141 antibodies that specifically recognize the heavy chain variable region of,and closely related to,MOPC141 myeloma protein whose V_H gene belongs to V_HQ52 family" Immunology. 72. 464-470 (1991)

Y.Minami：“特异性识别 MOPC141 骨髓瘤蛋白的重链可变区且与之密切相关的单克隆抗 V_H141 抗体，该蛋白的 V_H 基因属于 V_HQ52 家族”《免疫学》72. 464-470 (1991)。

Y.Oka: "Transitory expression of Thyー1 antigen in immature B cell lines" Immunological Investigations. 21. 85-92 (1992)

Y.Oka：“未成熟 B 细胞系中 Thy-1 抗原的瞬时表达”《免疫学研究》21. 85-92 (1992)。

S.Tsukada: "Nucleotide deletion of T cell receptor Vγ_2 and Jγ_2 coding sequences at Vγ_2-Jγ_2 junctions in immature B cell line" Molecular Immunology.

S. Tsukada：“未成熟 B 细胞系中 Vγ_2-Jγ_2 连接处 T 细胞受体 Vγ_2 和 Jγ_2 编码序列的核苷酸缺失”分子免疫学。