ラウエ法の基礎としての酵素反応機構の速度論的解析

以劳厄法为基础的酶反应机理动力学分析

• 批准号: 06235101
• 负责人: 倉光 成紀
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06235101/
• 关键词: 触媒反応機構; 基質認識機構; 蛋白質工学; 部位特異的変異法; caged化合物; アミノ基転移酵素; X線結晶解析; ラウエ法

1.caged化合物の光分解反応の検討昨年度に続き、種々のcaged化合物の光分反応について、pH・照射光の波長・照射光の強度依存性を解析した。2.光照射及び反応追跡用装置の試作1.の結果を基にして、caged化合物を光分解させ、その後の酵素反応を追跡するための、反応追跡用装置を試作した。この装置をレーザー光装置に装着することによって、光軸合わせ等の煩雑な測定機器の調整が不要となる上、蛍光スペクトル・吸収スペクトルの同時測定も可能となった。3.溶液中における酵素反応過程の解析結晶中の酵素反応過程を時間分割ラウエ法で解析するために、2種類の酵素(アスパラギン酸アミノ基転移酵素、および、ω-アミノ酸:ピルビン酸アミノ基転移酵素)の溶液中における基質との反応過程をストップトフロー法で解析した。アミノ基転移酵素については、時分割ラウエに適した変異型酵素を、部位特異的変異法・キメラ酵素作製法により調整した。また、ω-アミノ酸:ピルビン酸アミノ基転移酵素については、ラウエ法による測定と同条件下デ、セレノヒポタウリンその他の基質との反応をストップトフロー法を用いて解析した。

The <s:1> photophotic reaction of caged compounds 応 <s:1> 検 discussion on the に続 に続 of the previous year, the <s:1> photophotic reaction of various 々 <s:1> caged compounds 応に <s:1> て て て て て て て て, pH, the dependence of irradiating light <s:1> wavelength and irradiating light <e:1> を analysis of た. 2. Light and び anti 応 tracing with device の attempt 1. の results を に し て, caged compounds を photolysis さ せ, そ の の after enzyme reverse 応 を tracing す る た め の, anti 応 tracing with device を try し た. こ の device を レ ー ザ ー に optical device containing す る こ と に よ っ て, optic axis わ せ etc. の vexed 雑 な の measurement machine adjustment が don't と な る, 蛍 light ス ペ ク ト ル, suction 収 ス ペ ク ト ル の simultaneous determination も may と な っ た. 3. The solution に お け る enzyme reverse 応 の parsing against 応 の enzyme in crystallization process を time division ラ ウ エ method で す る た め に, 2 species の enzyme (ア ス パ ラ ギ ン acid ア ミ ノ planning shift enzyme, お よ び, omega - ア ミ ノ acid: ピ ル ビ ン acid ア ミ ノ base planning shift enzyme) の solution に お け る matrix と の anti 応 process を ス ト ッ プ ト フ ロ ー method Youdaoplaceholder0 parses た. ア ミ ノ base planning shift enzyme に つ い て は, when segmentation ラ ウ エ に optimum し た を, site specific - different - different enzyme method, キ メ ラ enzyme method for に よ り adjustment し た. ま た, omega - ア ミ ノ acid: ピ ル ビ ン acid ア ミ ノ base planning shift enzyme に つ い て は, ラ ウ エ method に よ る デ と with conditions were measured, セ レ ノ ヒ ポ タ ウ リ ン そ の he の matrix と の anti 応 を ス ト ッ プ ト フ ロ を ー method with い て parsing し た.

项目成果

Kuramitsu,S.: "X-Ray Crystallographic Study of Pyridoxal 5'-Phosphate-Type Aspartate Aminotransferase from Escherichia coli in Open and Closed Forms" J.Biochem.116. 95-107 (1994)

Kuramitsu,S.：“来自大肠杆菌的开放和封闭形式的吡哆醛 5-磷酸盐型天冬氨酸转氨酶的 X 射线晶体学研究”J.Biochem.116。

Kuramitsu,S.: "Replacement of Active Site Lysine-239 of Thermostable Aspartate Aminotransferase by S-(2-Aminoethyl)Cysteine:Properties of the Mutant Enzyme" J.Biochem.115. 108-112 (1994)

Kuramitsu,S.：“用 S-(2-氨基乙基)半胱氨酸替换热稳定天冬氨酸氨基转移酶的活性位点赖氨酸 239：突变酶的特性”J.Biochem.115。

倉光成紀: "新生化学実験講座 第1巻 VII.タンパク質工学 天然タンパク質の安定性の分子設計" 東京化学同人,

Shigenori Kuramitsu：“新生物化学实验课程第1卷VII.天然蛋白质稳定性的蛋白质工程分子设计”东京化学同人，

Kuramitsu,S.: "Homologus Ligation" Trends Genet.10. 420 (1994)

Kuramitsu,S.：“同源连接”趋势 Genet.10。

Kuramitsu,S.: "NMR Studies of H Resonances in the 10-18-ppm Range for Aspartate Aminotransferase from Escherichia coli" J.Biol.Chem.269. 28027-28033 (1994)

Kuramitsu,S.：“大肠杆菌天冬氨酸氨基转移酶在 10-18 ppm 范围内 H 共振的 NMR 研究”J.Biol.Chem.269。