膜結合型細胞増殖因子を介したジャクスタクラインにおけるDRAP27の機能解析

膜结合细胞生长因子介导的近分泌中 DRAP27 的功能分析

• 批准号: 06680703
• 负责人: 目加田 英輔
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06680703/
• 关键词: 膜結合型細胞増殖因子; HB-EGF; ジャクスタクライン; DRAP27; インテグリン

膜結合型細胞増殖因子は細胞膜貫通領域を持った新しいタイプの細胞増殖因子で、細胞間情報伝達と細胞接着を結びつける因子として注目される。HB-EGFも膜結合型細胞増殖因子であるが、これには別の膜蛋白質DRAP27がアソシエ-トしている。そこで本研究では、Juxtacrine機構におけるDRAP27の役割を明らかにする目的で、1)Juxtacrine実験系の確立と、2)DRAP27のJuxtacrineにおける機能解析、3)HB-EGF-DRAP27とアソシエ-トする他の膜タンパク質の解析を行い、以下の結果を得た。(1)HB-EGFを発現した細胞とEGFファミリー増殖因子依存的に増殖するレシピエント細胞を共培養し、レシピエント細胞が細胞接着依存的に増殖するかどうかを調べたところ、増殖促進が認められた。この増殖促進活性は、HB-EGFの発現量に依存し抗HB-EGF抗体で中和されること、この活性はトランスウェルで両者の細胞を隔離すると認められなくなることから、HB-EGFのジャクスタクライン活性によるものであることが示された。(2)DRAP27のジャクスタクライン活性への影響を調べたところ、DRAP27はHB-EGFのジャクスタクライン活性を著しく上昇させた。(3)免疫沈降による共沈殿、架橋試薬によるクロスリンク実験から、DRAP27にインテグリンα3β1がアソシエ-トしていることを明らかにした。さらに、インテグリンα3β1は、DRAP27を介してHB-EGFとアソシエ-トしていること、3者のコンプレックスが細胞間接着部位に局在していることがわかった。これらの結果は、HB-EGFが単に増殖因子として単独に存在するのではなく、細胞接着因子や細胞外マトリックス蛋白質を含んだ機能的複合体として存在し、細胞接着を介した細胞間相互作用に働いていることを示唆している。

Membrane-bound cell growth factor is a new type of cell growth factor that penetrates the cell membrane, and an intercellular information transfer factor that binds to the cell. HB-EGF is a membrane-bound cell growth factor, and its membrane protein DRAP27 is a sensitive protein. The purpose of this study is to clarify the operation of DRAP27 in the context of Juxtacrine mechanism, 1) establish the Juxtacrine system, 2) analyze the function of DRAP27 in the context of Juxtacrine, 3) analyze the properties of HB-EGF-DRAP27 in the context of its functional properties, and obtain the following results. (1)HB-EGF expression in cells and EGF expression in cells dependent on growth factors. The proliferation promoting activity depends on the production of HB-EGF, the neutralization of anti-HB-EGF antibodies, and the isolation of HB-EGF from cells. (2) The activity of HB-EGF in DRAP 27 was increased. (3)Immuno-sedimentation, bridging, and drap27 are the most important factors in the development of immune systems. In addition to the above, the third group of cells is also connected to the third group of cells. These results indicate that HB-EGF is a single promoter and only exists in cells. Cell adhesion factors and extracellular protein complexes exist in cells. Cell adhesion mediates cell-cell interactions.

项目成果

Mitamura,T.: "Diphtheria toxin binds to the EGF-like domain of human heparin-binding EGF-like growth factor/diphtheria toxin receptor and inhibits specifically its mitoqenic activity" J.Biol.Chem.270. 1015-1019 (1995)

Mitamura,T.：“白喉毒素与人肝素结合 EGF 样生长因子/白喉毒素受体的 EGF 样结构域结合，并特异性抑制其有丝分裂活性”J.Biol.Chem.270。

Higashiyama,S.: "The membrane protein CD9/DRAP27potentiates the juxtacrine growth factor activity of the membrane-anchored heparin-binding EGF-like growth factor(HB-EGF)" in press.

Higashiyama,S.：“膜蛋白 CD9/DRAP27 增强膜锚定肝素结合 EGF 样生长因子 (HB-EGF) 的近分泌生长因子活性”，正在出版。

Iwamoto,R.: "Heparin-binding EGF-like growth factor,which acts as the diphtheria toxin receptor,forms a complex with membrane protein DRAP27/CD9,which up-requlatesfunctional receptors and diphtheria toxin sensitivity" EMBO J.13. 2322-2330 (1994)

Iwamoto, R.：“肝素结合 EGF 样生长因子充当白喉毒素受体，与膜蛋白 DRAP27/CD9 形成复合物，上调功能受体和白喉毒素敏感性”EMBO J.13。