hnRNP蛋白質の機能、構造相関

hnRNP蛋白的功能和结构关系

• 批准号: 06258206
• 负责人: 石川 冬木
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06258206/
• 关键词: RNA結合蛋白質; hnRNP; RNA; RNA・蛋白質相互作用; RNA結合ドメイン

今年度において、我々はhnRNP D蛋白質の機能構造相関を明らかにする目的で、cDNAをクローニングし、その一次構造を明らかにした上で、蛋白質全体、および各ドメイン単独やその組み合わせのrecombinant蛋白質を大腸菌を用いて産生させ、一本鎖RNAオリゴヌクレオチドとの結合特性を比較し、以下のような結果を得た。1)hnRNP D蛋白質は、アミノ端に二つのRBDを持ち、カルボキシル端にRGGの配列に富むRGGモチーフを持つ2xRBD-RGG構造を示す。2)二つのRBDをアミノ端よりRBD1,2とすれば、RBD-1とRGG領域をコードする部分にalternative splicingによると思われる配列の挿入を持つmRNAが存在し、その結果、それぞれの領域に19および49アミノ酸の挿入が予想される。3)RBD1、RBD2、RBD1+2および全長に相当するrecombinant蛋白質を用いたゲルシフトアッセイおよびフィルターバインディングアッセイの結果、RBD単独、すなわちRBD1やRBD2においても配列特異的一本鎖結合を行う。さらに、Kd値による比較より、RBD1+2は、RBD1およびRBD2の結合能を相加的に加えた結合能を示し、最後に、全長のrecombinant蛋白質の結合能はそれらをさらに上回ることが明らかになった。以上により、複数のRBDはお互いに独立して存在し機能すること、hnRNP D蛋白質においては、RBD1とRBD2とは一次構造に差が見られるものの、同じような核酸結合能に関する配列特異性を有することが明らかになった。

This year にお にお て, I 々 々 hnRNP D function of protein の tectonic facies masato を Ming ら か に す る purpose で, cDNA を ク ロ ー ニ ン グ し, そ の a tectonic を Ming ら か に し た で, protein all, お よ び each ド メ イ ン 単 alone や そ の group み close わ せ の recombinant protein を coliform を with い て produce さ せ, a lock RNA オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド と の Combining the characteristics を and comparing を, the following ような ような results を obtain た. 1) protein は, hnRNP D ア ミ ノ end に two つ の RBD を hold ち, カ ル ボ キ シ ル end に RGG の match column に rich む RGG モ チ ー フ を hold 2 XRBD つ - RGG tectonic を す. 2) two つ の RBD を ア ミ ノ end よ り RBD1, 2 と す れ ば, RBD - 1 と RGG field を コ ー ド す る part に the alternative Splicing に よ る と think わ れ る match column の scions into を hold つ mRNA が し, そ の results, そ れ ぞ れ の field に 19 お よ び 49 ア ミ ノ acid の scions into が to think さ れ る. 3) RBD1, RBD2, RBD1 + 2 お よ び span に quite す る recombinant protein を い た ゲ ル シ フ ト ア ッ セ イ お よ び フ ィ ル タ ー バ イ ン デ ィ ン グ ア ッ セ イ の results, RBD 単 alone, す な わ ち RBD1 や RBD2 に お い て も match column specific a combination lock う を line. さ ら に, Kd numerical に よ る compare よ り, RBD1 + 2 は, RBD1 お よ び RBD2 の binding energy を additive に plus え た binding energy を し, final に, span の の recombinant protein binding energy は そ れ ら を さ ら に last る こ と が Ming ら か に な っ た. Above に よ り, plural の RBD は お mutual い に independent し て exist し function す る こ と, hnRNP D protein に お い て は, RBD1 と RBD2 と は see a poor structure に が ら れ る も の の, with じ よ う な nucleic acid binding energy に masato す る match column specificity を have す る こ と が Ming ら か に な っ た.

项目成果

石川冬木: "染色体テロメアと細胞複製" 細胞工学. 13. 319-327 (1994)

Fuyuki Ishikawa：“染色体端粒和细胞复制”《细胞工程》13. 319-327 (1994)。

石川冬木: "遺伝子診断-対象となる疾患と方法-" 現代化学. 284. 45-51 (1994)

Fuyuki Ishikawa：“基因诊断-目标疾病和方法”Gendai Kagaku 284. 45-51 (1994)。