G1/S移行におけるRB蛋白質の役割

RB 蛋白在 G1/S 转变中的作用

• 批准号: 06262230
• 负责人: 田矢 洋一
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06262230/
• 关键词: RB蛋白質; 細胞周期; サイクリンD1; Cdk4; Cdk2; サイクリンE; サイクリンA

RB蛋白質の細胞増殖抑制活性は細胞周期特異的なリン酸化で制御されている。しかし、癌化のメカニズムを考える際に特に重要なG1/S移行期においては、サイクリンD、E、Aをそれぞれ含む少なくとも3種類以上のキナーゼがそのリン酸化に関与すると言われながらも、使い分けの機構などが不明であるので、それを解明することを目的とした。そこで、バキュロウィルスベクターを使って、サイクリンD1/Cdk4、サイクリンE/Cdk2とサイクリンA/Cdk2をそれぞれ発現・精製した。これらの精製キナーゼで多くの種類の合成ペプチドのリン酸化を行い、基質特異性の違いを解析した。さらに、RB蛋白質もリン酸化し、リン酸化ペプチドマップを作って、リン酸化部位の違いを解析した。その結果、サイクリンEやA依存性キナーゼによりリン酸化の共通モチーフはS/T-P-X-K/Rであるが、サイクリンD1/Cdk4のそれは明確に異なることがわかった。また、RB蛋白質上にはサイクリンD1/Cdk4特異的なリン酸化部位があることも見い出し、その部位を変異させたRB蛋白質も作製した。さらに、そのリン酸化部位を特異的に認識する抗体も作製できた。したがって、サイクリンEやA依存性キナーゼとサイクリンD1/Cdk4が同じ配列の所をリン酸化するという従来の説は誤りである。我々の実験が成功したのは、それぞれのキナーゼを精製して用いたことにあると思える。RB蛋白質は、サイクリンD1/Cdk4によりリン酸化で、何か特別な活性変化を来すのであろう。サイクリンD1は癌遺伝子にもなるサイクリンであるので、この発見によって、サイクリンD1が細胞癌化に関与するメカニズムの解明が大きく伸展すると期待できる。

The cell proliferation inhibitory activity of RB protein is controlled by the cell cycle-specific acidification.しかし、Cancer のメカニズムをukao える国际に特にimportantなG1/S transition period 3 types: においては, サイクリンD, E, Aをそれぞれ与む小なくともThe above のキナーゼがそのリンacidification and すると言われながらも、 make the points The organization is clear and the purpose is unknown.そこで、バキュロウィルスベクターを使って、サイクリンD1/Cdk4、サイククリンE/Cdk2とサイクリンA/Cdk2をそれぞれ発开・精品した.これらのRefined キナーゼで多くの Kinds のSynthetic ペプチドのリンAcidification を行い、Matrix-specific のviolation いをANALYSIS した.さらに, RB protein もリン acidification し, リン acidification ペプチドマップを って, リン acidification site のviolation いを analysis した.そのRESULT, サイクリンEやA Dependency キナーゼによりリンAcidification の common モチーフはS/T-P -X-K/Rであるが、サイクリンD1/Cdk4のそれはclear and differentなることがわかった. The にはサイクリンD1/Cdk4-specific なリン acidification site on the また, RB protein is made of があることも见い出し, and the その site is different from RB protein. We have produced antibodies that are specific to the acidified site of our products.したがって、サイクリンEやAdependencyキナーゼとサイクリンD1/C dk4 is the same as the arrangement of the so-called acidification of the acidification of the dk4. I'm using the いたことにあると思える. RB protein は, サイクリンD1/Cdk4 によりリン acidification で, and かかspecial なactive denatured をすのであろう.サイクリンD1はcancer legacy 伝子にもなるサイクリンであるので、この発见によって、サイクリンD1 がcell canceration and するメカニズムのclear clarification が大きくstretch するとexpectation できる.