G1/S移行期に働くRB蛋白質リン酸化酵素の解析

G1/S 过渡期作用的 RB 蛋白激酶分析

• 批准号: 08265264
• 负责人: 田矢 洋一
• 金额: $ 2.56万
• 依托单位: National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08265264/
• 关键词: RB蛋白質; サイクリンD1; サイクリンE; サイクリンA; Cdk4; Cdk2; リン酸化ペプチド

次のような成果を得た。1.サイクリンD1-Cdk4が、他のサイクリンEやA依存性キナーゼとは異なったアミノ酸配列の所をリン酸化することを明らかにした。サイクリンD1は癌遺伝子にもなるサイクリンであるので、この発見によって、サイクリンD1が細胞癌化に関与するメカニズムの解明が大きく進展すると期待できる。2.RB蛋白質上のSer780はサイクリンD1-Cdk4によってはリン酸化されるけれども、他のサイクリンE/A-Cdk2ではリン酸化されないサイトであることを明らかにした。このサイトはポケットBを過ぎてC末端領域に入った直後に存在する。3.RB蛋白質上に存在する推定13箇所のリン酸化サイトを認識する抗体をすべて作製した。このように、サイクリンEやA依存性キナーゼとサイクリンD1-Cdk4が同じ配列の所をリン酸化するという従来の説は誤りであることが本研究で明らかとなった。RB蛋白質は、サイクリンD1-Cdk4によるリン酸化で、何か特別な活性変化を来すのであろう。そのリン酸化部位をリン酸化されないアミノ酸に変えた変異体も作製できたので、サイクリンD1-Cdk4特異的リン酸化部位の生理的意義が解明されるのではないかと期待される。また、RB蛋白質上の13カ所のリン酸化サイトを区別する抗体は、それぞれのリン酸化サイトがどのキナーゼでリン酸化されるのかということを解析するための強力な道具となるであろう。特に、ラジオアイソトープを使わずに、フォスフォペプチドマッピングも必要なく、簡単な実験でより明瞭な結果が得られることは大きなメリットである。

The results of the second time are the same. 1.サイクリンD1-Cdk4が、のサイクリンEやA dependencyキナーゼとはISO なったアミノAcid coordination のSO をリン acidification することを明らかにした.サイクリンD1はcancer legacy 伝子にもなるサイクリンであるので、この発见によって、サイThe relationship between the canceration of クリンD1 cells and the progress of するメカニズムの大きく and the anticipation of it. 2.Ser780 はサイクリンD1-Cdk4 on RB protein is acidified.も、 His のサイクリンE/A-Cdk2ではリン acidified されないサイトであることを明らかにした.このサイトはポケットBをpass the ぎてC terminal area に into the ったstraight after に existence する. 3. Presumption of the presence of 13 antibodies on the RB protein.このように、サイクリンEやA dependency キナーゼとサイクリンD1-Cdk4が Same match List of をリン acidification するという従来の说はError りであることがThis study is made of で明らかとなった. RB protein は, サイクリンD1-Cdk4 によるリン acidification で, and かかspecial なactive denatured をすのであろう.そのリンacidified part をリンacidified されないアミノ acid に変えた変isomeric も できたので、サイクリThe physiological significance of the リン acidification site specific to ンD1-Cdk4 is explained and expected. The difference between また and RB protein is のリン acidified サイトをする antibody は, それぞれのリン acidified サイトがどのキナーゼでリン acidification されるのかということをanalytics するためのstrongな props となるであろう.特に、ラジオアイソトープを使わずに、フォスフォペプチドマッピングもNecessaryなく, 简単な実験でより明な results が got られることは大きなメリットである.

项目成果

Taya,Y.: "RB-kinases and RB-binding proteins:new points of view." Trends Biochem.Sci.22. 14-17 (1997)

Taya,Y.：“RB 激酶和 RB 结合蛋白：新观点。”

Taya,Y.et al.: "Cdk4-cyclin D1 and Cdk2-cyclin E/A phosphorylate different sites in the RB protein." Genomic Instability and Immortality in Cance. (in press).

Taya,Y.et al.：“Cdk4-cyclin D1 和 Cdk2-cyclin E/A 磷酸化 RB 蛋白中的不同位点。”

Kitagawa,M.et al.: "The consensus motif for phosphorylation by cyclin D1-Cdk4 is different from that for phosphorylation by cyclin A/E-Cdk2." EMBO J. 15. 7060-7069 (1996)

Kitakawa,M.et al.：“细胞周期蛋白 D1-Cdk4 磷酸化的共有基序与细胞周期蛋白 A/E-Cdk2 磷酸化的共有基序不同。”

Higashi,H.et al.: "Cyclin-dependent kinase-2 (Cdk2) forms an inactive complex with cyclin D1 since Cdk2 associated with cyclin D1 is not phosphorylated by Cdk7-cyclin H" Eur.J.Biochem.237. 460-467 (1996)

Higashi, H. 等人：“细胞周期蛋白依赖性激酶 2 (Cdk2) 与细胞周期蛋白 D1 形成无活性复合物，因为与细胞周期蛋白 D1 相关的 Cdk2 不会被 Cdk7-细胞周期蛋白 H 磷酸化”Eur.J.Biochem.237。