G1/S移行におけるRB蛋白質の役割

RB 蛋白在 G1/S 转变中的作用

• 批准号: 07254215
• 负责人: 田矢 洋一
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07254215/
• 关键词: RB蛋白質; 細胞周期; サイクリンD1; Cdk4; Cdk2; サイクリンE; サイクリンA; p107

RB蛋白質の細胞増殖抑制活性は細胞周期特異的なリン酸化で制御されている。しかし、癌化のメカニズムを考える際に特に重要なGl/S移行期においては、サイクリンD、E、Aをそれぞれ含む少なくとも3種類以上のキナーゼがそのリン酸化に関与すると言われながらも、使い分けの機構などが不明であるので、それを解明することを目的とした。そのために、サイクリンDl/Cdk4、サイクリンE/Cdk2とサイクリンA/Cdk2をそれぞれ精製し、これらの精製キナーゼで多くの種類の合成ペプチドや蛋白質のリン酸化を行い、基質特異性の違いを解析した。一方では、化学合成したリン酸化ペプチドを抗原として、RB蛋白質の特定リン酸化部位のみ認識するモノクローナル抗体の作製を試みた。その結果、サイクリンEやA依存性キナーゼによるリン酸化の共通モチーフはS/T-P-X-K/Rであるが、サイクリンDl/Cdk4のそれは明確に異なり、-2の位置にProを必要とすることがわかった。さらに、RB蛋白質上にはサイクリンDl/Cdk4特異的なリン酸化部位があることを見い出し、その部位を変異させたRB蛋白質も作製した。また、p107がサイクリンDl/Cdk4でリン酸化されることもことも見い出した。一方では、RB蛋白質の807番目のリン酸化セリンを認識するモノクローナル抗体が作製できた。Cdk4特異的なインヒビターであるp16は、多くの癌で失活している癌抑制遺伝子産物でもあるので、p16と同様な活性をもつ低分子物質は癌治療薬になると期待されるが、我々が発見したサイクリンDl/Cdk4の基質特異性は、そうした低分子物質の探索に利用できるはずである。

RB protein cell proliferation inhibitory activity is cell cycle-specific inhibition of acidification. In the case of cancer, it is particularly important to consider the transition period of Gl/S, such as D, E, A, etc., including more than 3 types of cancer, such as acidification, etc. The synthesis of various kinds of proteins and the analysis of matrix specificity are discussed in detail. A method for the production of anti-RB antibodies was developed based on the chemical synthesis of anti-RB proteins. The result is that S/T-P-X-K/R depends on E/A, D/Cdk depends on D/Cdk, D/Cdk depends on E/A, and D/Cdk depends on E/A. The RB protein was isolated from the Dl/Cdk4-specific DNA. The p107 is the only one that can be used for acid reactions. One of them is the recognition of the 807-point protein of RB and the production of the antibody. Cdk4-specific proteins are p16 and p16-specific proteins that inactivate cancer suppressor gene products. These proteins are p16-specific and have similar activities. We expect that low molecular weight substances will be used in cancer therapy.

项目成果

Taya, Y.: "Cell cycle-dependent phosphorylation of the tumor suppressor RB protein." Molecules and Cells. 5. 191-195 (1995)

Taya, Y.：“肿瘤抑制 RB 蛋白的细胞周期依赖性磷酸化。”

Sakai, Y. et al.: "cDNA sequence, chromosomal localization of a novel human protein RBQ-1 which binds to the retinoblastoma gene product." Genomics. 30. 98-101 (1995)

Sakai, Y. 等人：“与视网膜母细胞瘤基因产物结合的新型人类蛋白 RBQ-1 的 cDNA 序列和染色体定位。”

Ueno, Y., et al.: "Solid-phase synthesis of peptides containing O-phosphoryl serine and O-phosphoryl threonine using allyl group for phosphate protection." Bioorg. Med. Chem. Let.5. 823-826 (1995)

Ueno, Y. 等人：“使用烯丙基进行磷酸盐保护，固相合成含有 O-磷酰丝氨酸和 O-磷酰苏氨酸的肽。”

Inoue, A. et al.: "70-kDa heat shock cognate protein directly interacts with N-terminal region of the retinoblastoma gene product pRb-identification of a novel region of pRb mediating protein interaction." J. Biol. Chem.270. 22571-22576 (1995)

Inoue, A. 等人：“70-kDa 热休克同源蛋白直接与视网膜母细胞瘤基因产物 pRb 的 N 末端区域相互作用，鉴定了 pRb 介导蛋白质相互作用的新区域。”

Higashi, H. et al.: "Cdk2 forms an inactive complex with cyclin D1 since Cdk2 associated with cyclin D1 is not phosphorylated by Cdk7-cyclin H." Eur. J. Biochem.(in press). (1996)

Higashi, H. 等人：“Cdk2 与细胞周期蛋白 D1 形成无活性复合物，因为与细胞周期蛋白 D1 相关的 Cdk2 不会被 Cdk7-细胞周期蛋白 H 磷酸化。”